oxidative-fermentative (OF) testはHughとLeifsonによって1953年に開発されたテストです。 彼らは酸化菌（好気的条件下でのみ炭水化物から酸を生成する）と発酵菌（好気的・嫌気的条件下の両方で酸を生成する）を区別するためにOF培地を開発した。
糖分解微生物は発酵的または酸化的にグルコースを分解する。 発酵の最終生成物は比較的強い混合酸であり、従来の発酵試験液で検出することができる。 しかし、グルコースの酸化分解で生成する酸は極めて弱く少なく、その検出にはより感度の高いHugh and LeifsonのOF培地の酸化発酵培地が必要である。 この培地は、グルコースの量を発酵検出に用いる培地に見られる量より多くし、ペプトンの量を少なくして作られたものである。
- 寒天の濃度を3％から2％に下げ、半固形状にしている（これは菌の運動性の判定に役立つ）
- ペプトンの濃度を11％から2％に減らしている。 (ペプトンの代謝によって生じるアルカリ性生成物の量を減らし、これらの生成物による中和効果を低減させる).
- 炭水化物濃度を0.5%から1.0％（培地中のグルコース濃度の増加により、ブロムチモールブルーインジケーターで検出可能なレベルまでこれらの弱酸の産生が促進される）
原理：
酸化発酵試験とは、あるグラム陰性桿菌が発酵または好気的呼吸（酸化的）によってグルコースを代謝するかどうかを判定するものである。 嫌気性発酵の過程で、ピルビン酸は発酵の種類によって様々な混合酸に変換される。 発酵中に生成された高濃度の酸は、酸素の有無にかかわらず、OF培地中のブロムチモールブルー指示薬を緑から黄色に変えます。
特定の非発酵グラム陰性菌は好気性呼吸を用いてグルコースを代謝するので、解糖とクレブスサイクル中に弱酸を少量生成するに過ぎません。 ペプトン量を減らし、グルコース量を増やすことで、生成した弱酸の検出が容易になる。
用途：
OF試験は、グラム陰性菌が炭水化物を酸化的、発酵的に代謝するか、非糖化性（培地中の炭水化物を利用する能力がない）かを判定するために使用される。
培地：
Hugh and LeifsonのOF基礎培地；成分は以下の通り：
- Sodium chloride : 5.0 g
- Di-potassium phosphate : 0.3 g
- Peptone : 2.0 g
- Bromthymol blue:0.03 g
- Agar:3.0 g
- Glucose:10 g
- Water:1000 ml
Hugh and Leifson’s OF basal medium; the components are as follows.0 g
オートクレーブの前に pH は 7.1 に調節する必要があります。 培地は121℃で15分間オートクレーブした後、ろ過滅菌した糖質10%溶液を終濃度1%になるように無菌的に加える。
操作
- 試験管2本に試験菌を直管を用いて「半分まで」刺し込むように植え付ける。
- 各ペアのうち1本のチューブを滅菌ミネラルオイルまたは流動パラフィンで1cmほど覆い（酸素の拡散を防ぐことでチューブ内に嫌気状態を作り出す）、もう1本は空気に触れられるようにしておく。
- 両方のチューブを35℃で48時間培養する（増殖の遅い菌は結果が出るまで3～4日かかる）
解釈
酸の生成は、黄色に見えることで培地中で検出されます。 酸化菌の場合、まず培地表面付近で発色します。
以下のような反応パターンがあります。
- 発酵の結果です。 両チューブとも酸を生成する。 例：大腸菌
- 酸化反応：酸の生成により、pH指示薬であるブロムチモールブルーが緑から黄色に変わる。 開放管（好気性）で酸が産生され、油で覆われた管（嫌気性）で酸が産生されない場合は、酸化的な結果であることを示します。 酸化的代謝によりグルコースを代謝する非発酵菌は、酸化的結果を示します。例：緑膿菌
- Non saccharolytic (Negative OF result): Non saccharolytic (Negative OF result): 非糖分解性細菌は、OF結果が陰性となる。 陰性は、油で覆ったチューブの色が変化せず、場合によってはpHが上昇し（pH7.6）、開いたチューブの上部のブロムチモールブルーが緑から青に変化することで示されます。 pHの上昇は、培地中のペプトン（タンパク質）を分解する細菌がアミンを生成するためである
例：Alcaligenes faecalis.
品質管理
- グルコース醗酵菌: Escherichia coli
- Glucose oxidizer(グルコース酸化剤)。 緑膿菌
- 非糖化菌：モラクセラ属菌
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