Is Anti-Hepatitis C Virus Antibody Level an Appropriate Marker to Preclude the Need for Supplemental Testing?

Abstract

Objectives: In de huidige studie wilden we bepalen of de signaal-naar-cutoff (S/Co) ratio’s van reactieve anti-HCV monsters gebruikt kunnen worden als basis voor het vermijden van de noodzaak van aanvullend testen in onze studiepopulatie. Methoden: Wij analyseerden 901 anti-HCV-positieve sera van 8 instellingen in China. De Ortho VITROS anti-HCV assay en Monolisa Plus anti-HCV versie 2 werden gebruikt als screening assays om anti-HCV antilichamen op te sporen. Recombinant immunoblot assay (RIBA) en kwantitatieve testen voor HCV RNA werden uitgevoerd om de bevestigde HCV infectiestatus te valideren. Resultaten: Receiver operating characteristic curve analyses toonden aan dat 41,5% (114/275) van de waar-positieve monsters met S/Co ratio’s ≤3,0 gemist zouden worden en de negatief voorspellende waarde was 63,9 en 87,06%, met gebruik van real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) en RIBA als aanvullende testen, respectievelijk. 29,8% (90/302) van degenen die positief testten door RIBA-monsters werden gemist wanneer alleen RT-PCR als aanvullende test werd gebruikt. Conclusies: Wij stelden vast dat zeer lage anti-HCV niveaus (S/Co ≤3.0), zoals bepaald door chemiluminescentie immunoassay, geen geschikte marker was om de noodzaak van aanvullend testen in onze studiepopulatie uit te sluiten. Een screeningstrategie waarbij een secundaire HCV-antilichaamtest met andere HCV-antigenen dan de eerste test als aanvullende testmethode wordt gebruikt, moet verder worden bestudeerd. De immunoblot assay, als aanvullende testmethode, is nog steeds noodzakelijk.

© 2016 S. Karger AG, Basel

Inleiding

Hepatitis C virus (HCV) is de veroorzaker van de besmettelijke leverziekte hepatitis C. Het virus kan zowel acute als chronische hepatitis infectie veroorzaken, waardoor het een enorme gezondheidslast met zich meebrengt. Een aanzienlijk aantal mensen met chronische hepatitis C-infectie loopt een hoog risico op het ontwikkelen van levercirrose en hepatocellulair carcinoom, wat een ernstige mortaliteit en morbiditeit veroorzaakt. Daarom is het van essentieel belang om met HCV besmette personen te identificeren.

Enzyme immunoassays en chemiluminescentie immunoassays (CIA’s) zijn de twee belangrijkste screening immunoassays voor het opsporen van anti-HCV antilichamen. Hoewel de CIA-screeningmethode een betere specificiteit vertoont dan enzyme-immunoassays, kunnen deze anti-HCV-screeningtests vals-positieve resultaten opleveren. Daarom is het van essentieel belang de specificiteit van deze screeningstests te valideren met behulp van een aanvullende test. Recombinant immunoblot assay (RIBA) of HCV RNA polymerase kettingreactie (PCR) worden aanbevolen voor de bevestiging van positieve anti-HCV screeningstests. In 2013 hebben de Centers for Disease Control and Prevention (CDC), als gevolg van het stopzetten van RIBA, aanbevolen om een positief resultaat van een eerste anti-HCV screeningstest alleen te laten volgen door nucleïnezuurtesten (NAT) voor de detectie van HCV RNA. Een tweede ronde van anti-HCV screening biedt een alternatieve aanvullende testmethode voor bevestiging, volgens het algoritme gepubliceerd door Vermeersch et al. .

Guidelines gepubliceerd door de CDC namen het niveau van de signal-to-cutoff (S/Co) ratio ten opzichte van de anti-HCV concentratie op in laboratorium algoritmen voor anti-HCV testen in 2003. Monsters met een S/Co ratio ≥8,0, zoals bepaald met de VITROS anti-HCV-test (Ortho Clinical Diagnostics, Raritan, N.J., USA), worden als positief voor anti-HCV-antilichamen beschouwd. Met behulp van een analyse van de “receiver operating characteristic” (ROC) curve om de juiste S/Co ratio’s voor anti-HCV-tests te voorspellen, hebben eerdere studies aangetoond dat zeer lage anti-HCV S/Co ratio’s van <3,0 of 4,5 geassocieerd worden met een hoge diagnostische gevoeligheid en negatief voorspellende waarde (NPV), wat erop wijst dat er geen risico is op HCV-infectie en er bijgevolg geen bijkomende tests nodig zijn. Hoge anti-HCV S/Co ratio’s van ≥20,0, zoals bepaald met de Ortho VITROS anti-HCV assay, waren echter een nauwkeurige serologische marker van viremie . In deze studies werden monsters met hoge anti-HCV-niveaus verder geëvalueerd door HCV RNA-tests om de viremische status te beoordelen. Dergelijke strategieën, waarbij gebruik wordt gemaakt van anti-HCV S/Co ratio’s als maat voor de anti-HCV concentratie, minimaliseert tot op zekere hoogte het aantal personen dat aanvullend testen nodig heeft.

Daarom was het doel van deze studie om te bepalen of S/Co ratio’s van reactieve monsters gebruikt zouden kunnen worden als basis om de noodzaak van aanvullend testen te vermijden, en of secundaire anti-HCV testen een alternatief zouden kunnen bieden voor de aanvulling of bevestiging van HCV detectie. We evalueerden ook of RIBA vals-positieve anti-HCV resultaten verkregen uit initiële screening assays zou kunnen aanpakken als de HCV RNA resultaten negatief zijn.

Materialen en Methoden

Ethiekverklaring

De studie betrof het gebruik van overgebleven patiëntenmonsters. De Ethische Commissie van het Nationaal Centrum voor Klinische Laboratoria keurde ons gebruik van deze patiëntenmonsters goed, en wij hielden ons aan de grondbeginselen van de Verklaring van Helsinki. Aangezien voor deze studie geen gedetailleerde patiënteninformatie hoefde te worden verzameld en de gegevens anoniem werden geanalyseerd, verleenden de deelnemers geen schriftelijke geïnformeerde toestemming.

Serummonsters

De serummonsters van patiënten die in deze studie werden gebruikt, werden verzameld in het Algemeen Ziekenhuis van de Medische Universiteit van Ningxia, het Volksziekenhuis van de Universiteit van Peking, het Algemeen Ziekenhuis van Fuzhou van het Militaire Gebiedscommando van Nanjing, het Ziekenhuis van Shanghai Ruijin, het Ziekenhuis van de Provincie Shangdong, het Algemeen Ziekenhuis van de Militaire Regio Nanjing, het Oostziekenhuis van het Affiliated Hospital van het Medisch College van de Universiteit van Qingdao, en het Fujian Bloedcentrum in China. Alle serummonsters werden beoordeeld op de aanwezigheid van antilichamen tegen HCV met behulp van VITROS ECi CIA (Ortho Clinical Diagnostics). De S/Co ratio’s werden rechtstreeks door de geautomatiseerde apparatuur geregistreerd. Monsters met een S/Co ratio van ≥1,0 werden als reactief gedefinieerd op basis van de aanbeveling van de fabrikant. Serummonsters die reactieve anti-HCV resultaten vertoonden, werden op droog ijs verzonden naar het Nationaal Centrum voor Klinische Laboratoria in Peking voor verdere testen.

Screening Assays

Serummonsters die naar het Nationaal Centrum voor Klinische Laboratoria werden verzonden, werden eerst opnieuw getest met de VITROS ECi CIA. Sera die negatief waren met de VITROS ECi CIA werden als anti-HCV-negatief beschouwd, volgens de CDC-richtlijnen. Sera werden vervolgens getest met Monolisa Plus anti-HCV versie 2 (Monolisa Plus; Bio-Rad, Marnes-la-Coquette, Frankrijk) en monsters met S/Co-verhoudingen ≥1,0 werden als reactief beschouwd volgens de instructies van de fabrikant. Deze twee screeningtests gebruiken antigenen van een verschillende fabrikant.

Bevestigingstests

Kwantitatieve HCV NAT werd uitgevoerd op alle serummonsters met positieve ECi CIA resultaten (S/Co ratio’s ≥1) met gebruikmaking van de Roche COBAS AmpliPrep/COBASTaqMan HCV Test (Roche Diagnostics, Branchburg, N.J., USA) als bevestigingstest. De gevoeligheid (laagste aantoonbaarheidsgrens) van de kwantitatieve HCV NAT was 15 IE HCV RNA/ml. De tests en de interpretatie van de resultaten werden uitgevoerd volgens de instructies van de fabrikant. Wegens onvoldoende monstervolume werd HCV NAT echter niet uitgevoerd op 13 monsters.

Een derde-generatie RIBA (RIBA HCV 3.0; Ortho Clinical Diagnostics) werd gebruikt om de HCV recombinante eiwitten C100 (NS4), C33c (NS3), C22p (core), en NS5 op te sporen om de monsterstatus te bepalen. De resultaten werden geïnterpreteerd volgens de aanbevelingen van de fabrikant. Monsters werden als positief beschouwd wanneer ≥2 banden reactiviteit vertoonden, onbepaald wanneer slechts 1 band reactief was, en negatief wanneer geen reactiviteit werd waargenomen.

Definitie en statistische analyse

Individuen met HCV-positief RNA werden als viremisch beschouwd. Monsters met een positief RIBA-resultaat en negatief HCV RNA werden geregistreerd als echt antilichaampositief, niet-viremisch. Monsters met reactieve anti-HCV screeningtestresultaten maar negatieve HCV RNA-resultaten en negatieve of onbepaalde RIBA-resultaten werden gecategoriseerd als vals-positief.

ROC-curves werden geconstrueerd door gevoeligheid uit te zetten tegen 1 – specificiteit, met HCV RNA en de derde-generatie RIBA-test als gouden standaard, respectievelijk. Wij bepaalden de diagnostische gevoeligheid, diagnostische specificiteit, positief voorspellende waarde (PPV), NPV, en hun respectieve exacte 95% CI om HCV viremie en RIBA status te voorspellen bij S/Co ratio’s van 3,0, 8,0, en 20,0, volgens eerder gepubliceerde methoden. Optimale S / Co-verhoudingen werden geïdentificeerd uit de analyse van ROC curven en bijbehorende gegevens . We voerden ROC-analyse uit met behulp van Graphpad Prism 6 statistische software.

Resultaten

Er werden in totaal 1.017 monsters verzonden naar het National Center for Clinical Laboratories en opnieuw getest op anti-HCV antilichamen met behulp van CIA als de screening assay, en 901 monsters vertoonden reactieve resultaten (S/Co ≥1). Alle reactieve monsters (S/Co ≥1) werden ook getest met kwantitatieve HCV NAT-tests en RIBA van de derde generatie. HCV RNA-testresultaten die <15 IU/ml (onder het kwantificeerbare lineaire bereik) lagen, werden beschouwd als “HCV RNA reactief”, aangezien de RIBA-resultaten aantoonden dat 35,8% (63/176) van de monsters detecteerbare HCV RNA-waarden van <15 IU/ml vertoonden en RIBA-positief waren. Van deze 901 monsters werden 13 HCV RNA-tests niet uitgevoerd wegens onvoldoende monsterhoeveelheid; 586 monsters (65,0%) en 302 monsters (33,5%) toonden echter bevestigende HCV RNA-positieve respectievelijk -negatieve resultaten aan. Bovendien waren 577 (64,0%), 126 (14,0%) en 198 (22,0%) van de 901 monsters positief, negatief of onbepaald na aanvullend RIBA-onderzoek. Zoals blijkt uit tabel 1, werden van de 586 monsters met positieve HCV RNA-resultaten, 483 (82,4%) positief getest door RIBA, en van de 302 monsters met negatieve HCV RNA-resultaten, 90 (29,8%) positief getest door RIBA. Deze 90 monsters vertegenwoordigden echt-positieve anti-HCV-resultaten zonder virale replicatie.

De ROC-curven van de PCR-test werden geanalyseerd om op basis van CIA-resultaten afkapniveaus te bepalen voor de detectie van anti-HCV-antilichamen. Op basis van de ROC-curve van de PCR-test (fig. 1) en de bijbehorende diagnostische gevoeligheid, diagnostische specificiteit en PPV, stelden wij vast dat een S/Co ratio van 20,0 niet optimaal was, zoals aangetoond in eerdere studies . De overeenkomstige diagnostische gevoeligheid, diagnostische specificiteit, PPV, en NPV voor HCV RNA waren respectievelijk 63,82, 88,89, 91,67, en 56,20% (tabel 2). We bepaalden ook de diagnostische gevoeligheid, diagnostische specificiteit, PPV, en NPV en hun respectievelijke 95% CI voor de voorspelling van HCV viremie bij S/Co ratio’s van 3,0 en 8,0 (tabel 2). Wij analyseerden de ROC-curve van de RIBA-test voor verschillende afkapwaarden op basis van CIA-resultaten voor de diagnose van HCV-blootstelling. De RIBA ROC curve (fig. 2) en bijbehorende gegevens toonden aan dat een S/Co ratio van 20,0 overeenkwam met een diagnostische sensitiviteit, diagnostische specificiteit, PPV, en NPV voor bevestiging van HCV-antilichamen door RIBA van respectievelijk 69,84, 97,84, 97,75, en 70,75% (tabel 3). De tabellen 2 en 3 illustreren dat een S/Co ratio van ≥20 een beter onderscheid maakt tussen viremie en HCV blootstelling in gescreende anti-HCV-positieve stalen in vergelijking met andere S/Co ratio’s zoals 8.0.

De diagnostische sensitiviteit, diagnostische specificiteit, PPV en NPV, alsmede hun respectieve 95% CI bij het voorspellen van HCV-blootstelling voor verschillende cutoff-niveaus bij S/Co-verhoudingen van 3,0 en 8,0 worden weergegeven in tabel 3. Uit zowel de real-time PCR (RT-PCR) (fig. 1) als de RIBA (fig. 2) ROC curven, stelden we vast dat een S/Co ratio van 3,0 niet de hoogste waarde was die een diagnostische gevoeligheid van 100% oplevert. Tabel 1 toont aan dat 99 van de 275 personen (36%) met S/Co ratio’s van <3,0 viremische personen waren, en dat 15 HCV-blootstelling vertoonden zonder viremie. Deze resultaten illustreren dat patiënten met S/Co ratio’s <3.0 niet allemaal negatief waren voor zowel HCV viremie als HCV blootstelling.

Hoewel een S/Co ratio van 20.0 in vorige studies niet als een optimale cutoff werd bepaald, werden resultaten met een S/Co ratio ≥20.0 in de huidige studie nog steeds geclassificeerd als bezitters van hoge antilichaamspiegels. De monsters met een S/Co ratio tussen 3.0 en 19.99 werden geclassificeerd als monsters met een laag niveau. Monsters met zeer lage antHCV-spiegels en een S/Co ratio tussen 1,0 en 2,99 werden geselecteerd op basis van een eerdere studie die aantoonde dat deze monsters geen risico op HCV-infectie vertoonden. Deze drie antilichaamniveaus werden waargenomen in respectievelijk 411 (45,62%), 213 (23,64%) en 277 (30,74%) van de 901 monsters (fig. 3). Met uitzondering van 13 monsters die niet op HCV RNA werden getest wegens onvoldoende monstervolume, werd HCV viremie bevestigd door positieve HCV RNA-tests in 91,4% (374/409) van de monsters met hoge antilichaamspiegels, 55,4% (113/204) van de monsters met lage antilichaamspiegels, en 36,0% (99/275) van de monsters met zeer lage antilichaamspiegels (fig. 4). Er werd een significant verschil waargenomen in de virale replicatiefrequentie tussen monsters met hoge anti-HCV antilichaam niveaus (S/Co ratio’s ≥20,0; 91,4%) en die in de lage en zeer lage antilichaam niveau groepen (S/Co ratio’s tussen 1,0 en 19,99; 44,3%; p < 0,001, χ2 test). In onze studie vertoonden 586 viremische personen hogere antilichaamspiegels (gemiddelde S/Co ratio: 19,23, 95% CI: 18,4-20,1) dan personen (90 monsters) met bevestigde serologische HCV zonder viremie (gemiddelde S/Co ratio: 14,33, 95% CI: 12,2-16,4, p < 0,05). Een gemiddelde S/Co ratio van 2,94 (95% CI: 2,51-3,37) werd waargenomen bij 212 monsters die als vals-positief voor hepatitis C zonder viremie waren gedefinieerd, en met negatieve of onbepaalde RIBA-resultaten.

De resultaten van Monolisa Plus-tests in 888 CIA-positieve sera (S/Co ≥1) waarop eerder HCV RNA-tests werden uitgevoerd, worden weergegeven in tabel 4. De gevoeligheid en de specificiteit van de Monolisa Plus-test bedroegen respectievelijk 81,8 en 85,8%, vergeleken met bevestiging met RT-PCR en RIBA. De PPV en NPV bedroegen respectievelijk 94,85 en 59,67%. In 90 monsters met bevestigde serologische HCV zonder viremie, werden 16 monsters (17,8%) gemist bij gebruik van Monolisa Plus als een aanvullende test. In de 212 personen gedefinieerd als vals-positief voor hepatitis C zonder viremie met negatieve of onbepaalde RIBA, werden 31 monsters (14,6%) als vals-positief gedetecteerd voor anti-HCV antilichaam met behulp van de Monolisa Plus test.

Discussie

Onze studie toont aan dat zeer lage anti-HCV-antilichaamniveaus met S/Co ratio’s <3.0, zoals bepaald door de VITROS anti-HCV assay, geen valse positieven tegen anti-HCV identificeerden; daarom is deze groep geen nauwkeurige marker die de noodzaak van aanvullend testen kan voorkomen. Bevestigende anti-HCV-testen door RIBA of secundaire HCV-antilichaambepaling zijn niet nodig wanneer de S/Co ratio >20 is vanwege het hoge percentage waar-positieven dat wordt opgespoord (PPV: 97,75%).

Lai et al. meldden dat een S/Co ratio van 3,0 bepaald door de VITROS anti-HCV-test de hoogste waarde was die werd geassocieerd met een diagnostische sensitiviteit van 100% en een NPV van 100%, waarbij PCR of RIBA als gouden standaard werden gebruikt. Er werden geen positieve RIBA- of PCR-testresultaten gevonden in monsters met een S/Co ratio <3,0 in hun analyses. Daarom werd gesuggereerd dat aanvullend testen niet nodig was voor patiëntenmonsters met S/Co ratio’s <3.0. Contreras et al. en Oethinger et al. toonden eveneens aan dat zeer lage hepatitis C-antistofspiegels vals-positief waren en vermeden daarom aanvullend testen. Monsters met zeer lage hepatitis C-antistofspiegels in de bovengenoemde studies werden aangeduid als monsters met een S/Co-ratio van respectievelijk 4,5 en 5,0 . In de huidige studie was de gemiddelde S/Co ratio voor vals-positieve hepatitis C personen zonder viremie, en met negatieve of onbepaalde RIBA resultaten (n = 212) 2,94 (95% CI: 2,51-3,37). De CIA versus RT-PCR (fig. 2) en CIA versus RIBA (fig. 3) ROC-curven toonden echter aan dat een S/Co ratio van 3,0 niet geassocieerd was met een diagnostische sensitiviteit of NPV van 100%, waarbij PCR of RIBA als gouden standaard werden gebruikt. In onze populatie zou een cutoff S/Co ratio van 3,0 de detectie verhinderen van 41,5% (114/275) van de CIA-positieve stalen met S/Co ≤3,0 (tabel 1), met ofwel positief RNA (n = 99) of positieve RIBA (n = 15). Daarom bevelen wij aan dat aanvullend testen nog steeds vereist is voor patiënten met zeer lage anti-HCV antilichaamspiegels en S/Co ratio’s ≤3, zoals bepaald door CIA. Bovendien, hoewel een eerdere studie aantoonde dat slechts 1,8% van de personen met een S/Co ratio <20,0 viremisch waren, toonden wij aan dat 23,9% (212/888) van de monsters met dezelfde S/Co ratio’s viremisch waren. Daarom is het uitvoeren van aanvullende tests met HCV RNA-tests op alle monsters, ook die met lage antilichaamspiegels, niet kosteneffectief (tabel 5).

Interessant is dat de ROC-curve analyse in onze studie aantoonde dat een S/Co ratio van 20,0 geen optimale cutoff was, zoals in eerdere studies werd gesuggereerd. De verschillen in de bevindingen kunnen worden toegeschreven aan de volgende drie redenen. Ten eerste ging de vorige studie ervan uit dat alle monsters met positieve resultaten, bepaald door RT-PCR-testen, ook positief zouden zijn door RIBA. De huidige studie toonde aan dat 6,14% (6/586) en 11,4% (67/586) van de monsters met positieve RT-PCR-resultaten negatieve respectievelijk onbepaalde resultaten vertoonden door RIBA. Ten tweede waren de studiepopulaties verschillend. Lai et al. stelden een algoritme voor HCV-tests voor op basis van de resultaten in een populatie van veteranen. Oethinger et al. voerden de studie uit met bloeddonormonsters. De populatie in onze studie was echter afkomstig uit drie groepen: patiënten van een leverziektenkliniek (14%, 127/901), patiënten van andere ziektenklinieken (83%, 748/901), en bloeddonoren (3%, 26/901). Het verschil in prevalentie van anti-HCV antilichamen in de verschillende studiepopulaties zou een verklaring kunnen zijn voor de verschillen in optimale S/Co ratio cutoffs. Ten derde varieert de verdeling van het predominante HCV-subtype regionaal; zo zijn HCV-1b en 2a de meest voorkomende subtypes in China. Dit zou de oorzaak kunnen zijn van de verschillende resultaten tussen de studies voor de VITROS anti-HCV assay.

Onze waarden voor diagnostische specificiteit (91,67%) en PPV (88.89%) bij het voorspellen van HCV viremie met behulp van de VITROS anti-HCV assay bij een S/Co ratio van 20,0 waren hoger dan de waarden (respectievelijk 58,8 en 81%) die door Lai et al. werden gerapporteerd, maar waren lager dan die (96,6 en 93,7%) die door Contreras et al. werden gerapporteerd. De resultaten toonden aan dat het aandeel van onze populatie met een S/Co-ratio van ≥20,0 maar met HCV-viremie tussen de percentages lag van de populaties die door Lai et al. en Contreras et al. werden onderzocht. Diagnostische sensitiviteit (75,77%) en NPV (62,83%) bij een S/Co ratio van 8,0 waren veel lager dan vergelijkbare resultaten in de twee eerdere studies, wat suggereert dat wij een groter deel van onze populatie identificeerden met S/Co ratio’s ≥8,0 maar die ook HCV viremie hebben.

De huidige studie toonde aan dat 586 viremische individuen hogere antilichaamspiegels hadden (gemiddelde S/Co ratio: 19,23, 95% CI: 18,4-20,1). Wij toonden ook aan dat van de 409 monsters getest op HCV RNA met S/Co ratio’s ≥20.0, op basis van CIA, 374 positief waren voor HCV RNA (91.4%). Het RNA-positiviteitspercentage verschilde van dat gerapporteerd in eerdere studies: 81% , 90% , 93% , 81% , en >60% . Van de 34 monsters met S/Co ratio’s ≥20,0 en met negatief HCV RNA, waren 33 monsters RIBA-positief en 1 monster was RIBA-indeterminaat. Van de twee monsters die wegens onvoldoende volume niet op HCV RNA werden getest, was er één RIBA-positief en was het andere RIBA-onbepaald. Het percentage waar-positieven bedroeg ten minste 99,5% (408/410). De resultaten toonden ook aan dat 99,8% (409/410) van de monsters met S/Co ratio ≥20,0 reactief waren, zoals bepaald door de Monolisa Plus test.

In onze studie toonden, met behulp van ROC-curve analyse, de hoge diagnostische specificiteit en PPV waarden voor de voorspelling van ofwel viremie door RT-PCR of aanwezigheid van anti-HCV antilichamen door RIBA aan dat een S/Co ratio ≥20,0 sterk wijst op HCV blootstelling. Daarom bevelen wij aan, althans voor onze studiepopulatie, dat monsters met S/Co ratio’s ≥20,0 geen aanvullende RIBA-tests of secundaire immunoassay-tests ondergaan. Dit zou onnodig zijn aangezien deze monsters met zulke hoge S/Co ratio’s worden bevestigd door positieve anti-HCV RIBA resultaten ≥98%. Bij evaluatie voor antivirale therapie, zouden deze monsters direct moeten overgaan tot NAT om de HCV viremische status te beoordelen (tabel 5).

Een strategie voor HCV antilichaam testen met behulp van twee enzyme immunoassays in een routine klinisch laboratorium is gevalideerd, en de gevoeligheid en specificiteit van de bevestiging van de tweede enzyme immunoassay waren 98,15 en 98,33%, respectievelijk . De CDC heeft onlangs aanbevolen om te testen met een tweede HCV-antilichaamtest die verschilt van de initiële antilichaamtest die wordt gebruikt voor de diagnose van HCV-infectie wanneer het resultaat van HCV RNA negatief is, als gevolg van het stopzetten van HCV RIBA . In de huidige studie werden de monsters ook getest met Monolisa Plus. De resultaten toonden aan dat 17,8% van de monsters (16/90) met bevestigde serologische HCV zonder viremie werden gemist wanneer Monolisa Plus werd gebruikt als de aanvullende testmethode. Immunodeficiëntie zou een veel voorkomende oorzaak kunnen zijn van vals-negatieve anti-HCV resultaten bij chronische HCV-geïnfecteerde patiënten. Onze vorige studie van bloeddonors toonde ook aan dat zelfs met twee screeningstests naast NAT, sommige anti-HCV-positieve stalen nog steeds gemist werden, wat suggereert dat er misschien geen geschikte combinatie bestaat om een 100%-gevoeligheidsgraad te bereiken en virale transmissie te vermijden. In deze studie werd 14,6% van de monsters (31/212) als vals-positief voor anti-HCV door Monolisa Plus gedetecteerd. De resultaten tonen aan dat een strategie met secundaire HCV-antilichaamtesten met verschillende HCV-antigenen van de eerste test als aanvullende screeningmethode geen uitstekende strategie was voor nauwkeurige HCV-screening in onze populatie.

Daarom, hoewel er veel nadelen zijn, zoals hoge kosten, vereiste van gespecialiseerde apparatuur en gekwalificeerd personeel, verlengde uitvoeringstijd, en onbepaalde resultaten, is de immunoblottest als aanvullende test nog steeds noodzakelijk, vooral voor de niet-viremische persoon met vals-negatieve anti-HCV-resultaten. Een eerdere studie evalueerde de gevoeligheid van vijf anti-HCV immunoblot assays waarvoor in Frankrijk een vergunning is verleend en toonde aan dat de resultaten minder uiteenliepen tussen de assays met meer uniforme criteria voor interpretatie. De RIBA HCV 3.0-test is niet langer beschikbaar; daarom moeten andere immunoblottests worden geselecteerd voor aanvullend onderzoek. Wanneer de S/Co ratio op basis van de VITROS anti-HCV assay tussen 1,0 en 20,0 ligt, moeten aanvullende testen worden uitgevoerd, d.w.z. een immunoblot assay voor monsters zonder viremische hepatitis (tabel 5).

Onze interpretatie van anti-HCV resultaten met gebruikmaking van S/Co ratio’s en het type aanbevolen aanvullende testen is samengevat in tabel 5. Als de S/Co ratio <20,0 is, op basis van CIA, moet HCV RNA-onderzoek ook worden uitgevoerd als bevestigingstest voor het onderscheiden van niet-viremische hepatitis C of niet-hepatitis C. Herhaalde HCV RNA-onderzoek of vervolgonderzoek naar HCV-antilichamen wordt aanbevolen als de geteste persoon in de afgelopen 6 maanden mogelijk is blootgesteld aan HCV of klinische aanwijzingen heeft voor HCV-ziekte. Voor positieve monsters zonder viremie zijn immunoblottests als aanvullend onderzoek nog steeds noodzakelijk. Als de S/Co ratio ≥20.0 is, gebaseerd op CIA, dan zou het uitvoeren van RT-PCR de aanwezigheid van HCV viremie verder kunnen beoordelen.

Acknowledgments

Wij danken alle vermelde instellingen in Materiaal en Methoden voor het ter beschikking stellen van monsters.