Gerinnungstests werden durchgeführt, um das Vorhandensein eines Lupus-Antikoagulans nachzuweisen, das die Zeit von Gerinnungstests auf Phospholipidbasis verlängern kann.
Das Vorhandensein eines Lupus-Antikoagulans ist hochspezifisch für APS, und es besteht ein starker Zusammenhang zwischen letzterem und thrombotischen Ereignissen oder fötalem Verlust.
Die Zahl der falsch-positiven und falsch-negativen Ergebnisse ist jedoch ziemlich hoch.
Viele Faktoren können die mangelnde Sensitivität und Spezifität dieser Tests beeinflussen, darunter prä-, analytische und post-analytische Variablen.

Diagnosekriterien für zirkulierende Lupusantikoagulanzien

Es gibt vier solcher Kriterien, die im Folgenden zusammengefasst werden.

Tabelle II: Kriterien für die Labordiagnose von Lupusantikoagulanzien

1. Verlängerung der phospholipidabhängigen Gerinnungstestzeiten

2. Nachweis der Hemmung in einem gemischten Patienten/Normalplasmatest

3. Nachweis, dass die verlängerte Gerinnungszeit phospholipidabhängig ist: Verkürzung oder Korrektur der ursprünglich verlängerten Gerinnungszeit durch Zugabe von überschüssigem Phospholipid (Bestätigungstest)

4. Ausschluss spezifischer, gegen Gerinnungsfaktoren gerichteter Hemmstoffe (z.z. B. Anti-Faktor-VIII-Antikörper)

Präanalytische Variablen beim Screening auf zirkulierende Lupus-Antikoagulanzien

Die präanalytische Phase ist für die Diagnose von APS von entscheidender Bedeutung.
Das Vorhandensein von Thrombozytenresten im Plasma kann Gerinnungstests beeinträchtigen, die von aus Thrombozyten stammenden Phospholipiden abhängen; solche Phospholipide können in der Probe vorhandene Antiphospholipid-Antikörper neutralisieren und falsch-negative Ergebnisse liefern. Es wird daher empfohlen, eine doppelte Zentrifugation durchzuführen, die eine erste Zentrifugation bei 2 000 g für 15 Minuten bei Raumtemperatur umfasst, gefolgt von einer zweiten Zentrifugation bei über 2 500 g für 10 Minuten, um Plasma zu erhalten, das weniger als 10 000 Thrombozyten/µL enthält.

Auswahl der Tests

Es wurden zahlreiche phospholipidabhängige Tests vorgeschlagen.
Die International Society on Thrombosis and Hemostasis (ISTH) hat aufgrund der unterschiedlichen Empfindlichkeit der Tests und der fehlenden Standardisierung bestimmter Tests Leitlinien für die Auswahl der zu verwendenden Tests herausgegeben.
Es sollten zwei getrennte Testsysteme verwendet werden, die auf unterschiedlichen Prinzipien beruhen.
Diluted Russell viper venom time (DRVVT) sollte in allen Fällen verwendet werden. Dieser Test gilt als spezifisch und robust für den Nachweis von Lupus-Antikoagulantien.
Der zweite durchzuführende Test ist der APTT, der aufgrund seiner Empfindlichkeit Kieselsäure als Aktivator verwendet. Die Verwendung von Kaolin oder Ellagsäure als Aktivator wird nicht empfohlen, ebenso wenig wie die Verwendung der verdünnten Thromboplastinzeit, von Tests auf der Grundlage der Ecarine- oder Textarine-Zeit oder der Kaolin-Gerinnungszeit.

Mischstudie

Das verwendete gepoolte Plasma sollte nach den üblichen Methoden hergestellt werden. Eine doppelte Zentrifugation ist erforderlich, um ein Plasma zu erhalten, das weniger als 10 000 Thrombozyten/µl enthält und eine Aktivität von nahezu 100 % für alle Faktoren aufweist. Kommerzielles gepooltes Plasma, entweder lyophilisiert oder gefroren, kann verwendet werden, sofern es die erforderlichen Bedingungen erfüllt und für diesen Zweck validiert wurde.
Der Mischtest muss ein Verhältnis von 1:1 zwischen Testplasma und gepooltem Normalplasma ohne Vorinkubation beinhalten.
Ein Thrombinzeittest vor der Mischstudie könnte das Vorhandensein von Heparin oder anderen Inhibitoren in der Probe nachweisen. Bestimmte Reagenzien, insbesondere die in DRVVT-Tests verwendeten, enthalten jedoch einen Heparin-Inhibitor, so dass der Test in Proben durchgeführt werden kann, die bis zu 0,8 IE Anti-Xa/ml enthalten.

Bestätigungstests

Bei diesen Tests wird die Korrektur der Gerinnungszeit für die Plasmaprobe in Gegenwart von überschüssigem Phospholipid bewertet. Es sollten zweischichtige Phospholipide oder Phospholipide in hexagonaler Phase verwendet werden. Umgekehrt wird die Verwendung von tiefgefrorenen, aufgetauten Thrombozyten aufgrund von Schwankungen zwischen den Chargen nicht empfohlen.

Ausschluss spezifischer Inhibitoren, die gegen Gerinnungsfaktoren gerichtet sind

Das Screening auf spezifische Inhibitoren, die gegen einen bestimmten Gerinnungsfaktor (in erster Linie Faktor VIII oder Faktor IX) gerichtet sind, ist von wesentlicher Bedeutung, da das Vorhandensein solcher Inhibitoren die Patienten einem hohen und möglicherweise lebensbedrohlichen Blutungsrisiko aussetzen kann, das eine sofortige Behandlung durch spezialisierte Teams erfordert. Dieser Test umfasst die Bestimmung des fraglichen Faktors und gegebenenfalls ein spezifisches Screening und die Bestimmung des Inhibitors.