Zeitlich begrenzte trächtige Mäuse und Ratten sind wichtige Forschungsinstrumente, die in der Entwicklungsforschung, der Gentechnik und der Erzeugung von Gewebekulturen eingesetzt werden. Sie sind der effizienteste Weg, um eine Kohorte von Embryonen, Föten oder Welpen mit einem genau definierten, abgestimmten Alter zu erhalten. Aber was genau sind zeitlich festgelegte trächtige Mäuse?
Was sind zeitlich festgelegte trächtige Mäuse und Ratten?
Ein zeitlich festgelegtes trächtiges Weibchen ist eine Maus oder Ratte mit einem genau bekannten Paarungsdatum. Dies ermöglicht entweder die Ernte von Embryonen oder Föten in einem gewünschten Gestationsalter oder die Erzeugung von Würfen, die an einem bestimmten Tag geboren werden.
Diese zeitlich festgelegten Paarungen werden durchgeführt, indem die Paarungen an einem bestimmten Tag angesetzt werden und am nächsten Tag auf Anzeichen für eine Kopulation geprüft werden. Weibchen, die Anzeichen für eine Kopulation zeigen (Spermapfropfen bei Mäusen, positive Vaginalabstriche bei Ratten), werden isoliert. Bei Taconic Biosciences wird der Tag des Nachweises von Spermazellen bei den Weibchen als „spermapositives Datum“ bezeichnet und gilt als erster Tag der Trächtigkeit (alle zeitlich festgelegten trächtigen Modelle sollten nach dem spermapositiven Datum bestellt werden).
In den frühen Stadien der Trächtigkeit ist es schwierig, die Schwangerschaft durch visuelle Beobachtung oder Abtasten zu bestätigen. Nach vierzehn Tagen kann die Trächtigkeit durch visuelle Beobachtung und Abtasten der Welpen in utero bestätigt werden.
Embryonale Diapause bei zeitlich festgelegten schwangeren Mäusen und Ratten
Es gibt verschiedene Methoden zur Bestimmung des Schwangerschaftsalters, einschließlich der Entwicklung, des Gewichts, der Größe und des Aussehens, wobei die Wurfgröße diese Faktoren beeinflusst. Eine ausgezeichnete Referenz ist online bei der UNSW für Ratten und Mäuse verfügbar.
Die Entwicklung von Embryonen und Föten verläuft in der Regel nach einem genau definierten Zeitplan, aber Forscher beobachten gelegentlich, dass eine Ernte aus Embryonen oder Föten zu bestehen scheint, die jünger sind als die bekannte Schwangerschaftsdauer vermuten lässt.
Embryonale Diapause kann der wahrscheinliche Schuldige in den Fällen sein, in denen Embryonen oder Föten jünger erscheinen als erwartet. Die embryonale Diapause ist ein vorübergehender Stillstand der Embryonalentwicklung, der vor der Einnistung der Blastozysten eintritt. Dies kann durch Umweltstressoren oder mütterliche Einflüsse wie die Laktation1 ausgelöst werden. Infolgedessen kann die tatsächliche Entwicklungsgeschwindigkeit des Embryos vom nominellen Gestationsalter abweichen.
Bevorzugte Stämme und Bestände für die zeitgesteuerte Paarung
Modell | Zuchtalter | Wurfgröße | Typische Trächtigkeit |
Swiss Webster | 8 Wochen | 11 Welpen | 19 – 20 Tage |
Black 6 | 8 Wochen | 7 Welpen | 18 – 20 Tage |
Sprague Dawley® | 8 – 10 Wochen | 10 Welpen | 21 – 23 Tage |
Ratten
Die ausgezeichnete Reproduktionsleistung des Sprague Dawley®-Modells macht es zu einer bevorzugten Wahl für die Erzeugung von zeitlich festgelegten trächtigen weiblichen Ratten. Embryonen von zeitlich festgelegten trächtigen Sprague-Dawley®-Ratten werden für die Untersuchung der Embryonalentwicklung, der Teratologie und der Reproduktionstoxikologie sowie für Experimente verwendet, bei denen fötales Gewebe aus bestimmten Embryonalstadien verwendet wird.
Mäuse
Die gezüchtete Swiss-Webster-Maus hat ebenfalls eine hervorragende Reproduktionsleistung und ist eine ausgezeichnete Wahl für Experimente, bei denen ein gezüchtetes Mausmodell akzeptabel ist. Wenn ein Inzuchtstamm erforderlich ist, wird in der Regel die Black-6-Maus verwendet. Zeitlich schwangere Swiss-Webster-Mäuse liefern in der Regel eine höhere Embryo-/Fötusausbeute als die Black 6, die kleinere Wurfgrößen hat.
Anwendungen zeitlich schwangerer Mäuse und Ratten
Trächtige Tiere werden in der Gentechnik, bei der Entwicklung von Gewebekulturen und in der Entwicklungsforschung in großem Umfang eingesetzt. Die Möglichkeit, Embryonen und Föten in bestimmten Schwangerschaftsstadien zu entnehmen, ist für diese Studien von entscheidender Bedeutung.
- Die Entnahme von Embryonen (in der Regel nach Superovulation und zeitlich festgelegter Paarung) ist ein entscheidender Schritt bei der Schaffung von genetisch veränderten Tiermodellen. Zygoten werden in der Regel für die Mikroinjektion von Vorkernen (einschließlich CRISPR-Gene Editing) verwendet, während Blastozysten zu einem späteren Zeitpunkt geerntet und als Spenderembryonen für die Injektion modifizierter embryonaler Stammzellen verwendet werden.
- Maus- und Rattenembryonen und -föten werden häufig zur Erzeugung primärer Gewebekulturen verwendet, wie z. B. neuronale Kulturen oder Mausembryo-Fibroblasten.
- Trächtige Mäuse und Ratten werden häufig verwendet, um die Auswirkungen der Ernährung oder anderer Einflüsse während der Schwangerschaft und auf die Nachkommenschaft zu untersuchen.
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- Rasche Erzeugung von Maus- und Rattenmutanten durch CRISPR/Cas in einzelligen Embryonen
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