Testul oxidativ-fermentativ (OF) a fost dezvoltat de Hugh și Leifson în 1953. Aceștia au dezvoltat mediul OF pentru a diferenția între bacteriile oxidative (care produc acid din carbohidrați numai în condiții aerobe) și bacteriile fermentative (care produc acid atât în condiții aerobe, cât și anaerobe).
Microorganismele zaharolitice degradează glucoza fie pe cale fermentativă, fie pe cale oxidativă. Produșii finali ai fermentației sunt acizi amestecați relativ puternici care pot fi detectați într-un mediu convențional de testare a fermentației. Cu toate acestea, acizii formați în degradarea oxidativă a glucozei sunt extrem de slabi și mai puțini, iar pentru detectare este necesar mediul de fermentație prin oxidare, mai sensibil, al mediului OF al lui Hugh și Leifson. Mediul a fost realizat prin creșterea cantității de glucoză peste cea găsită în mediul utilizat pentru detectarea fermentației și prin diminuarea cantității de peptonă.
Mediul OF al lui Hugh și Leifson diferă de mediile de fermentație cu carbohidrați după cum urmează:
- Concentrația de agar este scăzută de la 3% la 2%, ceea ce îl face să aibă o consistență semisolidă (acest lucru ajută la determinarea motilității organismului).
- Concentrația de peptonă este scăzută de la 11% la 2%. (scăzând cantitatea de produs alcalin produs de metabolismul peptonului; reducând astfel efectul de neutralizare al acestor produse).
- Concentrația de carbohidrați este crescută de la 0,5% la 1.0% (concentrația crescută de glucoză din mediu sporește producția acestor acizi slabi până la un nivel care poate fi detectat cu ajutorul indicatorului albastru de bromtimol.)
Principiu:
Testul oxidativ-fermentativ determină dacă anumite tije gram-negative metabolizează glucoza prin fermentație sau prin respirație aerobă (pe cale oxidantă). În timpul procesului anaerob de fermentare, piruvatul este transformat într-o varietate de acizi amestecați, în funcție de tipul de fermentare. Concentrația mare de acid produsă în timpul fermentației va transforma indicatorul albastru de bromthymol din mediul OF din verde în galben în prezența sau absența oxigenului .
Certe bacterii gram-negative nefermentante metabolizează glucoza prin respirație aerobă și, prin urmare, produc doar o cantitate mică de acizi slabi în timpul glicolizei și al ciclului Krebs. Scăderea cantității de peptonă și creșterea cantității de glucoză facilitează detectarea acizilor slabi astfel produși. Se adaugă un tampon de fosfat dipotasic pentru a favoriza și mai mult detectarea acizilor.
Utilizări:
TestulOF este utilizat pentru a determina dacă bacteriile gram-negative metabolizează carbohidrații pe cale oxidantă, prin fermentație, sau dacă sunt nonsacrolitice (nu au capacitatea de a utiliza carbohidrații din mediu).
Mediu:
Mediul bazal OF al lui Hugh și Leifson; constituenții sunt următorii:
- Clorură de sodiu: 5,0 g
- Fosfat di-potasiu: 0,3 g
- Peptonă: 2.0 g
- Albastru de bromtimol:0,03 g
- Agar: 3,0 g
- Glucoză : 10 g
- Apă : 1000 ml
Ph-ul trebuie ajustat la 7,1 înainte de autoclavare. După ce mediul este autoclavizat la 121°C timp de 15 minute, se adaugă aseptic la mediu o soluție sterilizată prin filtrare de 10% soluție de carbohidrați, până la o concentrație finală de 1%.
Procedură
- Inoculați două tuburi de mediu de testare OF cu organismul de testare, folosind o sârmă dreaptă, înțepând „până la jumătatea fundului” tubului.
- Copriți un tub din fiecare pereche cu un strat de 1 cm de ulei mineral steril sau parafină lichidă (creează o stare anaerobă în tub prin împiedicarea difuziei oxigenului), lăsând celălalt tub deschis la aer.
- Incubați ambele tuburi la 35°C timp de 48 de ore (bacteriile cu creștere lentă pot avea nevoie de 3 până la 4 zile înainte ca rezultatele să poată fi observate)
Interpretare
Producția de acid este detectată în mediu prin apariția unei culori galbene. În cazul organismelor oxidative; producția de culoare poate fi observată mai întâi în apropierea suprafeței mediului.
În continuare sunt prezentate modelele de reacție:
- Rezultat fermentativ: Producție de acid pe ambele tuburi (deschise și acoperite). Acidul produs modifică indicatorul de pH, albastru de bromthymol, de la verde la galben. de exemplu: Escherichia coli
- Rezultat oxidativ: Producerea de acid în tubul deschis (aerob) și nu în tubul acoperit cu ulei (anaerob) indică un rezultat oxidativ. Bacteriile nefermentante care metabolizează glucoza prin intermediul metabolismului oxidativ dau un rezultat oxidativ. de exemplu, Pseudomonas aeruginosa
- Non-sacarolitic (rezultat OF negativ): Bacteriile nesaccolitice dau un rezultat OF negativ. Rezultatul negativ este indicat de lipsa modificării culorii în tubul acoperit cu ulei și, în unele cazuri, de o creștere a pH-ului (pH 7,6) care schimbă albastrul de bromtimol din verde în albastru în partea superioară a tubului deschis. Creșterea pH-ului se datorează producției de amine de către bacteriile care descompun peptona (proteina) din mediu.
de exemplu Alcaligenes faecalis.
Control de calitate
- Fermentor de glucoză: Escherichia coli
- Oxidant de glucoză: Pseudomonas aeruginosa
- Nonsacarolitic: Moraxella species
.
Lasă un răspuns