U pacjentów z IgG4-RD nie stwierdziliśmy ANA IgG4+, ale wykryliśmy ANA IgG1+ i IgG2+ (ryc. 1 i 2). Stwierdziliśmy również, że IgG4+ ANA występowały bardzo rzadko, podczas gdy IgG1/2/3+ ANA były wykrywane w układowych chorobach autoimmunologicznych (ryc. 2 i 3). Autoprzeciwciała o wzorze cytoplazmatycznym w teście Fluoro-HepANA™ nie są dokładnym ANA; przeciwciała „antycytoplazmatyczne” – np. przeciwciała anty-SS-A/Ro, przeciw syntezie aminoacylo-tRNA i przeciw cząsteczkom rozpoznającym sygnały – są znane w SS i PM. Testy ANA oparte na podklasach wykryły przeciwciała antycytoplazmatyczne IgG1/2/3+, ale nie IgG4 (ryc. 2, 3).

IgG4+ ANA jest bardzo rzadkie w układowych chorobach autoimmunologicznych, prawdopodobnie dlatego, że stosunek surowicy IgG4/IgG jest niski, mniej niż 5%, w tych chorobach (Tabela 2). Jednakże IgG4+ ANA nie zostało wykryte pomimo wysokiego stosunku IgG4/IgG w surowicy (43%) w IgG4-RD. Sugeruje to, że sama IgG4 nie jest wykorzystywana do wytwarzania ANA.

W wielu badaniach badano podklasy ANA w układowych chorobach autoimmunologicznych. Zouali i wsp. podali, że w SLE i mieszanej chorobie tkanki łącznej przeciwciała przeciwko dwuniciowemu DNA (dsDNA) były zdominowane przez IgG1/3, a przeciwciała przeciwko RNP były zdominowane przez IgG2. Anty-Sm, anty-RNP i anty-dsDNA w SLE, anty-SS-A/Ro i anty-SS-B/La w SS oraz anty-Scl-70 w SSc są podobno zdominowane przez IgG1. Jednak we wszystkich powyższych doniesieniach prawie nie wykryto ANA typu IgG4. Rigopoulou i wsp. zbadali przypadki pierwotnej żółciowej marskości wątroby i stwierdzili, że ANA było zdominowane przez IgG1/3, ale IgG4 nie zostało wykryte przez IIF oparte na podklasach. Powodem, dla którego ANA typu IgG2 było wyjątkowo częste w naszym badaniu, podczas gdy w poprzednich badaniach dominowały IgG1 i IgG3, może być fakt, że powinowactwa drugiego przeciwciała różniły się między badaniami. W teście ANA opartym na podklasach nie można dokładnie porównać mian pomiędzy podklasami, ponieważ drugie przeciwciała są różne. W poprzednich badaniach, ANA typu IgG2 było również wykrywane na umiarkowanym poziomie, podczas gdy ANA typu IgG4 było stale ujemne lub na niskim poziomie. W naszym badaniu ANA typu IgG4 również prawie nie wykryto.

Autoimmunologiczne zapalenie trzustki (AIP) jest zaburzeniem specyficznym dla danego narządu, obserwowanym w IgG4-RD. W AIP obserwuje się różne autoprzeciwciała, takie jak przeciwciała przeciwko laktoferynie i przeciwko anhydrazie węglanowej II. Asada i wsp. znaleźli przeciwciała przeciwko trzustkowemu inhibitorowi wydzielniczej trypsyny (PSTI) w AIP i wykazali, że miana przeciwciał anty-PSTI zmieniały się równolegle do poziomu IgG4 w surowicy. Poziomy IgG4 zmieniają się równolegle z aktywnością choroby IgG4-RD, jak donoszono w wielu badaniach, w tym w naszym poprzednim badaniu. Asada i wsp. uważali, że anty-PSTI może być ważnym czynnikiem w patofizjologii. Jednak immunoblotting podklas z anty-IgG1 lub anty-IgG4 jako drugimi przeciwciałami wykazał, że podklasa nie była IgG4, ale IgG1. Possibly, IgG4-type autoantibodies are difficult to produce in IgG4-RD patients.

However, some autoimmune diseases reportedly show IgG4-type autoantibodies. Rock i wsp. podali, że IgG4 były najczęstszymi (100%) przeciwciałami przeciwko desmogleinie (DSG)-1 wykrywanymi w surowicy pacjentów z pęcherzycą liściastą i wykazali patogenność przeciwciał anty-Dsg-1 typu IgG4 przy użyciu myszy Balb/c. Przeciwciało anty-Dsg-3 w pęcherzycy zwykłej było również IgG4-predominujące. Beck i wsp. wykazali metodą immunoblottingu, że przeciwciała przeciwko receptorowi fosfolipazy A2 (PLA2R) w idiopatycznej nefropatii błoniastej składały się głównie z IgG4. IgG4 jest podobno dominująca w przeciwciałach przeciwko cytoplazmie neutrofilów (ANCA). C-ANCA (IIF), proteinaza-3 (PR3)-ANCA (ELISA) i mieloperoksydaza (MPO)-ANCA (ELISA) w ziarniniaku z zapaleniem naczyń (GPA) oraz MPO-ANCA (ELISA) w zapaleniu naczyń wywołanym propylotiouracylem były zdominowane przez IgG1/4. Podobnie inni donosili, że IgG4 tworzyły większość C-ANCA (IIF) i PR3-ANCA (ELISA) w zapaleniach naczyń. Engelmann i wsp. podali, że przeciwciała przeciwko cyklicznemu cytrulinowanemu peptydowi (CCP) były zdominowane przez IgG1/4 w RZS. Jednak IgG4 w miażdżycach naczyń i RZS może nie mieć znaczenia patofizjologicznego. W analizach funkcjonalnych ANCA, IgG1 i IgG3 PR3-ANCA mogą stymulować neutrofile, podczas gdy IgG4 PR3-ANCA było tylko słabo stymulujące dla neutrofili. U chorych na RZS, którzy mieli wspólny epitop HLA-DR4, Engelmann i wsp. stwierdzili przewagę przeciwciał IgG3 anty-CCP i uznali, że przeciwciała typu IgG3 mogą mieć większe znaczenie w patofizjologii RZS. Ponieważ IgG4 ma słabą zdolność do aktywacji dopełniacza i cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał, jest mało prawdopodobne, aby IgG4 brały udział w mechanizmach uszkodzenia tkanek w chorobach autoimmunologicznych.

Co ciekawe, wydaje się, że istnieją patogenne i niefunkcjonalne autoprzeciwciała typu IgG4. ANCA typu IgG4 są uważane za mniej patogenne, w porównaniu do innych podklas ANCA w ANCA-associated vasculitis . Powinowactwa między ANCA typu IgG4 i ANCA innych podklas powinny być równe, ale zdolności aktywacji dopełniacza są różne, tak że rola ANCA typu IgG4 może być mniej znacząca niż ANCA innych podklas. Z drugiej strony, przeciwciało IgG4 anty-PLA2R ma wysokie powinowactwo i jest uważane za patogenne w idiopatycznej nefropatii błoniastej. Dlaczego przeciwciało IgG4 anty-PLA2R może wywierać patogenność bez zdolności aktywacji dopełniacza, może wynikać z faktu, że patogenność jest wnoszona przez zniszczenie barier elektrycznych błony podstawnej kłębuszków nerkowych.

Równocześnie, wskaźniki wykorzystania IgG4 różnią się wśród autoprzeciwciał i wśród chorób. IgG4 jest związana z przeciwciałami anty-Dsg-1/3, anty-PLA2R, anty-CCP i ANCA, ale nie z przeciwciałami anty-PTSI w AIP lub ANA w IgG4-RD i układowych chorobach autoimmunologicznych (tabela 3). Ta asymetria sugeruje, że IgG4 ma nieznane, ale pewne funkcje fizjologiczne lub patologiczne. Konieczne są dalsze analizy, aby poznać jej rolę.

Tabela 3 Zestawienie dominujących podklas w autoprzeciwciałach w IgG4-RD i chorobach autoimmunologicznych

W obecnym badaniu zaobserwowaliśmy, że wzorce ANA różniły się między podklasami IgG w niektórych przypadkach (ryc. 3, 4). Gdy w danym przypadku występuje kilka autoprzeciwciał, wykorzystywane podklasy różnią się pod względem autoantygenów. Można to wyjaśnić hipotezą, że każda podklasa IgG preferuje pokrycie własnego spektrum antygenów. Powodem, dla którego w ANA prawie nie znaleziono IgG4, może być fakt, że IgG4 nie pokrywa antygenów, które mogą być wykryte przez test ANA, tj. antygenów jądrowych lub pokrewnych antygenów bakteryjnych. Selektywny niedobór podklasy IgG2 jest często związany z infekcją bakteryjną wywołaną przez Neisseria meningitidis i Streptococcus pneumoniae , tak więc uważa się, że IgG2 odgrywa rolę w ochronie przed tymi bakteriami. Rola IgG4 nie została dostatecznie poznana. Jeśli IgG4 jest związana z jakimś typem mikroorganizmu, a antygeny mikroorganizmów i autoantygenów są podobne, jak w przypadku Dsg-1/3, PLA2R, PR3 i białek cytrulinowanych, wyjaśniałoby to, dlaczego przeciwciała typu IgG4 przeciwko tym białkom były dominująco generowane.

Nasze wyniki sugerują, że IgG4-RD nie jest chorobą autoimmunologiczną, a wysokie poziomy surowicy IgG4 w IgG4-RD są tylko niespecyficzne. Oparte na podklasach testy ANA w tym badaniu obejmowały zarówno antygeny jądrowe, jak i cytoplazmatyczne w komórkach HEp-2 i mogą przesiewać szeroki zakres niezmodyfikowanych wszechobecnych antygenów. Jednakże, analiza ta ma ograniczenia: zmodyfikowane antygeny, takie jak białka cytrulinowe i antygeny specyficzne dla narządów nie są badane. Liczba przypadków w tym badaniu jest ograniczona. Istnieje możliwość, że w IgG4-RD mogą występować nieznane autoprzeciwciała typu IgG4. Potrzebna jest dalsza analiza.