Testy krzepnięcia są wykonywane w celu wykazania obecności antykoagulantu toczniowego zdolnego do wydłużenia czasu trwania testów krzepnięcia opartych na fosfolipidach.
Występowanie antykoagulantu toczniowego jest wysoce swoiste dla APS i istnieje silny związek między tym ostatnim a zdarzeniami zakrzepowymi lub utratą płodu.
Jednakże liczba wyników fałszywie dodatnich i fałszywie ujemnych jest dość wysoka.
Wiele czynników może wpływać na brak czułości i swoistości tych testów, w tym zmienne przedanalityczne, analityczne i poanalityczne.
Kryteria diagnostyczne dla krążącego antykoagulantu tocznia
Istnieją cztery takie kryteria i są podsumowane poniżej.
1. Wydłużenie czasu testu krzepnięcia zależnego od fosfolipidów
2. Wykazanie inhibicji w teście mieszanym pacjent/normalne osocze
3. Wykazanie, że wydłużony czas krzepnięcia jest zależny od fosfolipidów: skrócenie lub korekta pierwotnie wydłużonego czasu krzepnięcia przez dodanie nadmiaru fosfolipidów (test potwierdzenia)
4. Wykluczenie specyficznych inhibitorów skierowanych przeciwko czynnikom krzepnięcia (np.
Zmienne przedanalityczne w badaniach przesiewowych w kierunku krążącego antykoagulantu toczniowego
Faza przedanalityczna ma kluczowe znaczenie dla rozpoznania APS.
Obecność resztkowych płytek krwi w osoczu może wpływać na testy krzepnięcia, które zależą od fosfolipidów pochodzących z płytek krwi; takie fosfolipidy mogą neutralizować przeciwciała antyfosfolipidowe obecne w próbce i dawać wyniki fałszywie ujemne. Dlatego zaleca się wykonanie podwójnego wirowania obejmującego wstępne wirowanie przy 2 000g przez 15 minut w temperaturze otoczenia, a następnie drugie wirowanie przy ponad 2 500g przez 10 minut w celu uzyskania osocza zawierającego mniej niż 10 000 płytek krwi/µL.
Wybór testów
Zaproponowano wiele testów zależnych od fosfolipidów.
Czas rozcieńczania jadu żmii Russella (DRVVT) powinien być stosowany we wszystkich przypadkach. Ten test jest uważany za specyficzny i solidny do wykrywania antykoagulantów tocznia.
Drugim testem, który należy wykonać, jest APTT z użyciem krzemionki jako aktywatora ze względu na jego czułość. Użycie kaolinu lub kwasu elagowego jako aktywatora nie jest zalecane, podobnie jak użycie rozcieńczonego czasu tromboplastyny, testów opartych na czasach ekarynowych lub tekstarynowych, lub kaolinowego czasu krzepnięcia.
Badanie mieszania
Użyte połączone osocze powinno być przygotowane zgodnie ze zwykłymi metodami. Podwójne odwirowanie jest wymagane w celu uzyskania osocza zawierającego mniej niż 10 000 płytek krwi/µL i posiadającego aktywność zbliżoną do 100% dla wszystkich czynników. Komercyjne osocze zbiorcze, liofilizowane lub mrożone, może być wykorzystane pod warunkiem, że spełnia wymagane warunki i zostało zatwierdzone do tego celu.
Badanie mieszania musi obejmować stosunek 1:1 między badanym osoczem a zbiorczym normalnym osoczem bez wstępnej inkubacji.
Badanie czasu trombinowego przed badaniem mieszania może wykazać obecność w próbce heparyny lub innych inhibitorów. Jednakże niektóre odczynniki, w szczególności te używane w testach DRVVT, zawierają inhibitor heparyny, co pozwala na wykonanie testu w próbkach zawierających do 0,8 IU anty-Xa/mL.
Testy potwierdzające
Obejmują one ocenę korekty czasu krzepnięcia dla próbki osocza w obecności nadmiaru fosfolipidu. Powinny być stosowane fosfolipidy dwuwarstwowe lub fosfolipidy o fazie heksagonalnej. Nie zaleca się natomiast stosowania płytek mrożonych rozmrożonych ze względu na zmienność między seriami.
Wykluczenie specyficznych inhibitorów skierowanych przeciwko czynnikom krzepnięcia
Badanie przesiewowe w kierunku specyficznego inhibitora skierowanego przeciwko danemu czynnikowi krzepnięcia (przede wszystkim czynnikowi VIII lub czynnikowi IX) jest niezbędne, ponieważ obecność takich inhibitorów może narażać pacjentów na duże i potencjalnie zagrażające życiu ryzyko krwotoczne wymagające natychmiastowego postępowania przez wyspecjalizowane zespoły. Badanie to obejmuje oznaczenie danego czynnika oraz, w razie potrzeby, specyficzne badania przesiewowe w kierunku inhibitora i jego oznaczenie.
.
Dodaj komentarz