Koagulační testy se provádějí za účelem prokázání přítomnosti lupusového antikoagulantu, který je schopen prodloužit dobu fosfolipidových koagulačních testů.
Přítomnost lupusového antikoagulantu je vysoce specifická pro APS a existuje silná souvislost mezi ním a trombotickými příhodami nebo ztrátou plodu.
Počty falešně pozitivních a falešně negativních výsledků jsou však poměrně vysoké.
Nedostatečnou senzitivitu a specificitu těchto testů může ovlivnit mnoho faktorů, včetně preanalytických, analytických a postanalytických proměnných.
Diagnostická kritéria pro cirkulující lupus antikoagulans
Existují čtyři taková kritéria, která jsou shrnuta níže.
1. Kritéria pro laboratorní diagnostiku lupus antikoagulans
. Prodloužení časů koagulačních testů závislých na fosfolipidech
2. Průkaz inhibice ve smíšeném testu pacient/normální plazma
3. Průkaz, že prodloužený čas koagulace je závislý na fosfolipidech: zkrácení nebo korekce původně prodlouženého času koagulace přidáním nadbytku fosfolipidu (konfirmační test)
4. Vyloučení specifických inhibitorů namířených proti koagulačním faktorům (např.např. protilátky proti faktoru VIII)
Preanalytické proměnné při screeningu cirkulujícího lupus antikoagulans
Preanalytická fáze je pro diagnózu APS klíčová.
Přítomnost zbytkových trombocytů v plazmě může ovlivnit koagulační testy, které jsou závislé na fosfolipidech odvozených od trombocytů; tyto fosfolipidy mohou neutralizovat antifosfolipidové protilátky přítomné ve vzorku a vést k falešně negativním výsledkům. Proto se doporučuje provést dvojitou centrifugaci zahrnující počáteční centrifugaci při 2 000 g po dobu 15 minut při pokojové teplotě a následnou druhou centrifugaci při více než 2 500 g po dobu 10 minut, aby se získala plazma obsahující méně než 10 000 trombocytů/µl.
Výběr testů
Bylo navrženo mnoho testů závislých na fosfolipidech.
Vzhledem k rozdílné citlivosti jednotlivých testů i k nedostatečné standardizaci některých testů vydala Mezinárodní společnost pro trombózu a hemostázu (ISTH) pokyny týkající se výběru testů, které mají být použity.
Měly by být použity dva samostatné testovací systémy využívající různé principy.
Ve všech případech by měl být použit zředěný čas jedu Russellovy zmije (DRVVT). Tento test je považován za specifický a robustní pro detekci lupus antikoagulans.
Druhým testem, který je třeba provést, je APTT s použitím oxidu křemičitého jako aktivátoru z důvodu jeho citlivosti. Použití kaolinu nebo kyseliny ellagové jako aktivátoru se nedoporučuje, stejně jako použití zředěného tromboplastinového času, testů založených na ekarinovém nebo textarinovém čase nebo kaolinového času srážení.
Studie míchání
Použitá směsná plazma by měla být připravena v souladu s obvyklými metodami. K získání plazmy obsahující méně než 10 000 trombocytů/µl a mající aktivitu blízkou 100 % pro všechny faktory je nutná dvojitá centrifugace. Komerční směsná plazma, lyofilizovaná nebo zmrazená, může být použita za předpokladu, že splňuje požadované podmínky a byla pro tento účel validována.
Zkouška míchání musí zahrnovat poměr 1:1 mezi testovanou plazmou a směsnou normální plazmou bez předinkubace.
Testování trombinového času před studií míchání by mohlo prokázat přítomnost heparinu nebo jiných inhibitorů ve vzorku. Některá činidla, zejména ta používaná v testech DRVVT, však obsahují inhibitor heparinu, což umožňuje provést test ve vzorcích obsahujících až 0,8 IU anti-Xa/ml.
Konfirmační testy
Ty zahrnují vyhodnocení korekce koagulačního času pro vzorek plazmy v přítomnosti nadbytku fosfolipidu. Měly by být použity dvouvrstvé fosfolipidy nebo fosfolipidy s hexagonální fází. Naopak použití zmrazených rozmražených trombocytů se nedoporučuje z důvodu variability mezi jednotlivými šaržemi.
Vyloučení specifických inhibitorů namířených proti koagulačním faktorům
Vyšetření specifického inhibitoru namířeného proti danému koagulačnímu faktoru (především faktoru VIII nebo faktoru IX) je nezbytné, protože přítomnost takových inhibitorů může pacienty vystavit vysokému a potenciálně život ohrožujícímu riziku krvácení, které vyžaduje okamžité řešení specializovanými týmy. Tento test zahrnuje stanovení daného faktoru a v případě potřeby specifický screening a stanovení inhibitoru
.
Napsat komentář