Katechiny mají mnoho výhod včetně prevence nebo snížení poškození kůže. Katechiny jsou důležité složky z čajových lístků a mají intenzivní antioxidační a reprezentativní fyziologické aktivity. Patří do skupiny polyfenolových sloučenin, které se nacházejí v mnoha léčivých rostlinách. Hlavními zdroji katechinů jsou Camellia sinensis (C. sinensis) a C. assumica. Zelený čaj obsahuje 75-80 % vody a polyfenolové sloučeniny (flavanoly, flavandioly, flavonoidy a fenolové kyseliny) (Zillich et al. 2015) a katechiny tvoří více než 75 % polyfenolových sloučenin v čajových listech. Jsou to třísloviny kondenzačního typu s kruhem a základní strukturou flavan-3-ol. Mají mnoho chemických strukturních znaků, jako jsou hydroxylové skupiny (-OH), které se snadno kombinují s jinými materiály (Singh et al. 2011). Existuje osm katechinů (obr. 1): C ((-)-katechin), EC ((-)-epikatechin), ECG ((-)-epikatechingallát), EGC ((-)-epigalokatechin), EGCG ((-)-epigalokatechin galát), GC ((-)-galokatechin), CG ((-)-katechingallát) a GCG ((-)-galokatechingallát). Principiálními typy jsou EC, ECG, EGC a EGCG (Jin et al. 2006), které jsou významně zastoupeny v zeleném čaji (Fung et al. 2012). Katechiny poskytují několik zdravotních výhod tím, že vychytávají volné radikály a zpomalují degradaci extracelulární matrix vyvolanou ultrafialovým (UV) zářením a znečištěním (Shi et al. 2016). Katechiny také přímo ovlivňují pokožku aktivací syntézy kolagenu a inhibicí produkce enzymů matrixové metaloproteinázy (Arct et al. 2003). Díky hydroxylu v galátové skupině jsou EGCG a ECG vysoce účinnými lapači volných radikálů ve srovnání s mnoha jinými standardními antioxidanty, jako je kyselina askorbová, tokoferol a trolox (Gulati et al. 2009; Matsubara et al. 2013; Kim et al. 2018). Díky těmto užitečným účinkům se čajové katechiny stále častěji používají v lékařských, farmaceutických a kosmetických přípravcích a jsou aktivně studovány v různých přístupech.

Obr. 1
obr. 1

Strukturní vzorec osmi katechinů. Katechiny mají mnoho chemických strukturních znaků, například hydroxylové skupiny (-OH), které se snadno spojují s jinými materiály. Existuje osm katechinů: C ((-)-katechin), EC ((-)-epikatechin), ECG ((-)-epikatechingalát), EGC ((-)-epigalokatechin), EGCG ((-)-epigalokatechin galát), GC ((-)-galokatechin), CG ((-)-katechingalát) a GCG ((-)-galokatechingalát). Principiálními typy jsou C, EC, ECG, EGC a EGCG

Antioxidační aktivita

Katechiny jsou dobře prostudované látky s prokázanými antioxidačními účinky. Byly provedeny studie na zvýšení stability katechinů a zvýšení rychlosti jejich vstřebávání do lidského organismu. Nedávné studie se zaměřily na maximalizaci účinnosti antioxidantů. Kyselina gallová a katechiny vykazují stabilní antioxidační aktivitu syntézou galaktanu a katechinové antioxidanty se kovalentně vážou na řetězce bílkovin (Spizzirri et al. 2009). Caesalpinia decapetala (C. decapetala) účinně ovlivňuje oxidační stabilitu emulze olej ve vodě (Gallego et al. 2017). Analýza pomocí LC-ESI/LTQ Orbitrap/MS autochtonních zárodků z oblasti Kampánie ukázala vyšší úroveň antioxidační aktivity ve srovnání s neautochtonními zárodky (D’Urso et al. 2018). Enzymatická glukosylace kyseliny kávové a EGCG vede ke zlepšení antioxidační schopnosti v buněčném modelu stárnutí kůže vyvolaného UV zářením (Nadim et al. 2014). Plamének plotní (Delonix regia) má silné antioxidační a antimikrobiální účinky (Feng et al. 2014). Antioxidační schopnost EGCG je účinná proti poškození lidských dermálních fibroblastů vyvolanému H2O2 (Feng et al. 2013). Lipofilizované deriváty EGCG vykazují zvýšenou antioxidační aktivitu (Zhong a Shahidi 2011). Flavonoidy a triterpenoidy z plodů Alphitonia neocaledonica mají cytotoxickou, antioxidační a antityrosinázovou aktivitu a jsou užitečnými kosmetickými složkami (Muhammad et al. 2014). Pomocí kapalinové chromatografie ve spojení s ionizací elektrosprejem pro rychlé profilování fenolických sloučenin z listů javoru červeného (Acer rubrum) bylo zjištěno přibližně 106 fenolických sloučenin (Li a Seeram 2018). Extrakty z bambusových stonků prokázaly antimelanogenní a antioxidační aktivitu v bezbuněčném systému a v melanomových buňkách B16F10 (Choi et al. 2018). Etanolový extrakt ze stromu marula je velmi účinný při zvyšování aktivit in vitro. ECG a EGCG v extraktu ze stromu marula přispívají k aktivitám proti stárnutí (Shoko et al. 2018). Kůra Cocos nucifera vykazovala antioxidační a antidepresivní aktivity prostřednictvím oxidačních změn v prefrontální kůře (Lima et al. 2016).

Ochranná aktivita proti UV záření

Rozsáhlé studie ochranné schopnosti katechinů proti UV záření prokázaly, že katechiny jsou schopny zvýšit fotostabilitu a ochranu kůže před UV zářením. Byly rovněž provedeny studie zaměřené na nalezení účinného využití katechinů v různých oblastech, například v prevenci stárnutí kůže, a to zvýšením jejich účinnosti a stability. Katechiny zlepšují stabilitu nanoetosomálních suspenzí EGCG a zvyšují tak účinnost inhibice poškození kůže způsobeného UVB zářením (Zhang et al. 2016). Emulgace katechinů zvyšuje prostupnost kůží, ochrannou schopnost proti UV záření a účinky proti stárnutí (Yoshino et al. 2013). Různé analýzy, včetně3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium bromidu (MTT) a western blot testů, ukazují, že ECG je účinným lékem na poškození keratinocytů HaCaT vyvolané UVB zářením (Huang et al. 2007). Vystavení simulovanému slunečnímu záření se sorbenty ukázalo, že extrakty z hroznových jader mají širokospektrální ochranu díky své vysoké fotostabilitě a červenému posunu v celém indexu UVA a UVB záření (Martincigh a Ollengo 2016). Flavonoidy vykazují vysokou světelnou a tepelnou stabilitu při konzervaci a uvolňování poly(N-vinyl-pyrrolidonu) roubovaného kyselinou metakrylovou (Parisi et al. 2012). Inhibiční aktivita proti houbové tyrosináze složek izolovaných z Neolitsea aciculate ukazuje, že tato rostlina by mohla být zdrojem látek proti tvorbě melaninu (Kim et al. 2012). Kultivované lidské keratinocyty indukované UV zářením byly ošetřeny EGCG a byly hodnoceny účinky na zánětlivé dráhy a jadernou translokaci transkripčního faktoru NF-κB. EGCG inhiboval zánětlivé dráhy vyvolané UVB a UVA zářením a apoptózu u kultivovaných lidských keratinocytů (Xia et al. 2005).

Antimikrobiální aktivita

Probíhá výzkum zaměřený na výrobu biologické a funkční kosmetiky s využitím přírodních antimikrobiálních vlastností katechinů. Pokusy na lidských epiteliálních buňkách KB ukazují, žeflavan-3-oly a proanthokyanidin z Limonium brasiliense (L. brasiliense) interagují s gingipainy a inhibují adhezi Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) k epiteliálním buňkám hostitele (de Oliveira et al. 2017). Ve studiích antimikrobiální aktivity fullerenu a jeho hydroxylovaných derivátů byl C60 (OH)44 stejně silný a široce účinný jako katechin, který byl použit jako kontrola pro hodnocení (Aoshima et al. 2009). Extrakty ze zeleného čaje významně snižovaly hladinu Streptococcus mutans (S. mutans) ve slinách a zubních placích dětí (Goyal et al. 2017).

Antialergické a protizánětlivé účinky

Alergie jsou způsobeny nadměrně aktivní reakcí imunitního systému, která vyvolává svědění a zánět. Kontakt s určitými alergeny vede k citlivému stavu. Byly provedeny studie antialergické aktivity katechinů. Byly zkoumány antialergenní složky čajovníku oolong a inhibiční aktivita katechinů na histamin uvolňovaný z krysích peritoneálních žírných buněk pasivně senzibilizovaných protilátkou IgE proti vaječnému albuminu. Nejsilnější antialergenní složkou mezi čajovými katechiny byl GCG (Ohmori et al. 1995). Extrakty z pytloviny Acerola (A. bagasse) mohou modulovat aktivitu proteáz, které působí koagulačně, antikoagulačně a trombolytickým účinkem, a také destrukci fosfolipidů, čímž snižují zánět a agregaci krevních destiček (Marques et al. 2018). Metanolové extrakty z kůry kmene Vitellaria paradoxa (V. paradoxa) vykazovaly protizánětlivé a antiartritické aktivity při akutním a chronickém zánětu u potkanů Wistar albino (Foyet et al. 2015). Chlorhexidin a výtažky ze zeleného čaje snižovaly korozi a opotřebení dentinu. Některé inhibitory matricových metaloproteáz mohou být preventivním opatřením k zabránění eroze-abraze dentinu (Magalhães et al. 2009).

Antivirové a protinádorové aktivity

Bylo provedeno mnoho studií zaměřených na prevenci a léčbu virových infekcí (spalničky, AIDS, plané neštovice, SARS, MERS, Ebola atd.). Experimentální studie prokázala protichřipkovou aktivitu katechinů zeleného čaje (Ide et al. 2014). Ent EC-(4alfa→8) EC (Ent-Epiafzelechin-(4alfa -> 8) -epiafzelechin z Cassiajavanica neovlivňoval životaschopnost a proliferaci buněk, ale bránil průniku a adhezi viru herpes simplex do buněk (Cheng 2006). V klinických studiích kloktání zeleného čaje třikrát denně nezměnilo míru nakažení virem chřipky. Vědci navrhli, že je třeba provést další studie antivirové aktivity katechinů (Ide et al. 2014). Studie zjistily v rostlinách protirakovinné látky, které inhibují proliferaci rakovinných buněk, včetně katechinů. Extrakty bohaté na polyfenoly z Lawsonia inermis (L. inermis) L. (Henna) inhibují oxidativní radikály a proliferaci rakovinných buněk (Kumar et al. 2016).

Aktivizace průchodu kožní bariérou

Katechiny mají vynikající antioxidační aktivitu, ale jejich vysoká molekulová hmotnost a vazba na lipidovou dvojvrstvu kůže jsou překážkou průchodu kožní bariérou. Bylo učiněno mnoho pokusů o překonání tohoto problému. Intradermální podávání pomocí mikrojehel umožňuje EGCG proniknout do hlubších vrstev kůže. Mikroporace kůže pomocí mikrojehel s maltózou usnadňuje průnik EGCG přes stratum corneum do hlubších vrstev kůže, včetně živé epidermis a dermis (Puri et al. 2016). Na základě použití emulzí olej-voda s různým obsahem oleje pronikla směs polyfenolů s obsahem katechinů pomocí difuzních buněk typu Franz do epidermis a dermis v prasečí kůži in vitro (Zillich et al. 2013). Hydrofilní přísady snižují aktivitu flavonoidů tím, že zvyšují jejich rozpustnost. K průniku flavonoidů z extraktu z hroznových listů do kůže, stejně jako rutinu, kvercetinu a katechinů, dochází přes lipofilní membrány (Arct et al. 2002). Extrakty EGCG, kvercetinu, 14-EGCG a ginkgo biloby vykazují vynikající penetraci kůží v čerstvé bílé kůži získané z břišní chirurgie na statických difuzních celách Franzova typu (dal Belo et al. 2009). Monoglycerolové estery (MGE) – tekuté krystaly (LC) – lipidové a glycerolmonoolátové (GMO) -LC formulace mají lepší penetraci kůží z různých fyzikálně-chemických vlastností léčiva. MGE formulace mají nižší viskozitu, rychlejší uvolňování léčiva a lepší kožní permeabilitu než GMO formulace. Nízká viskozita MGE-LC-přípravků může mít vliv na difúzi a prostupnost léčiva kůží (Kadhum et al. 2017). Liposomy mohou aktivně procházet vrstvami kůže přes umělé fosforové lipidové membrány. Fosfolipidy mají mimořádnou afinitu k určitým skupinám flavonoidů a směs katechinů a fytosomů, což je komplex přírodně aktivních složek a fosfolipidů (hlavně lecitinu), zvyšuje elasticitu kůže (Bombardelli 1991). Interakce mezi peptidem rybího kolagenu (FCP) a EGCG byla analyzována pomocí spektroskopických technik, jako jsou fluorescenční spektra kopírující kruhový dichroismus a infračervená spektroskopie s Fourierovou transformací (FTIR). Při tvorbě komplexů FCP-EGCG byla zjištěna větší expozice prolinu. FCP působí jako zesilovač EGCG a zvyšuje absorpci EGCG do kůže a těla (Yang et al. 2015c). Chitosanové mikročástice obsahující extrakty zeleného čaje vykazují prostup katechinů do podkožních tkání a studie metabolismu ukazují, že chitosanové mikročástice zlepšují podkožní dodávku katechinů a zároveň omezují jejich degradaci kožními enzymy (Wisuitiprot et al. 2011).

Podpora buněčné aktivity

Účinky přírodních extraktů, včetně katechinů, na buněčnou aktivitu byly rozsáhle studovány. Extrakty z černého, zeleného a bílého čaje mají antimelanogenní aktivitu u imortalizovaných melanocytů. Fermentované čajové lístky mají nejnižší cytotoxicitu a nejvyšší antimelanogenní aktivitu (Kim et al. 2015). EGCG snížil sekreci a produkci melaninu v buňkách lidského melanomu v mechanistické studii podporující hydrataci kůže, která měřila antioxidační a pigmentační vlastnosti. EGCG zvyšuje expresi genu syntetázy kyseliny hyaluronové a proliferaci buněk (Kim et al. 2018). EGCG-5′-O-α-glukopyranosid (EGCG-5′Glu), derivát EGCG, má antioxidační účinky v bezbuněčných i buněčných systémech. EGCG-5′Glu obnovuje životaschopnost buněk zprostředkovanou reaktivními formami kyslíku (ROS), reguluje kaspázy a molekuly přežití buněk a zvyšuje proliferaci buněk modulací aktivity NF-κB (Han et al. 2018).

Využití kalů

Využití kalů s vysokou přidanou hodnotou ve farmacii, kosmetice a potravinářství dosáhlo značného pokroku. Tanin, extrakt z pevného odpadu vznikajícího v kaštanových průmyslových procesech, je účinným přírodním antioxidantem pro kosmetický, potravinářský a farmaceutický průmysl (Aires et al. 2016). Použitá kávová sedlina je velkým zdrojem bioaktivních sloučenin zajímavých pro kosmetický a farmaceutický průmysl a methylanthiny a fenoly jsou zdravotně významné sloučeniny přítomné v použité kávové sedlině. FTIR byla použita k vyhodnocení užitečných účinných látek v použité kávové sedlině (Magalhães et al. 2016). Identifikace a kvantifikace fenolických sloučenin a radikálové scavengingové aktivity dvou vedlejších produktů Vitis vinifera L. cv noir ukázaly, že mají vysoký potenciál jako antioxidanty (Reis et al. 2016). Prokyanidiny, složené z oligomerů katechinu, fungují v antioxidační aktivitě, chelataci kovů, zachycování radikálů a přímé vazbě na enzymy. Na základě těchto výsledků se procyanidinové oligomery silně vážou s trvalým keratinem vlasů a inhibují destrukci vlasů způsobenou oxidačním poškozením (Kim 2011). Lakáza katalyzuje polymeraci fenolových sloučenin, což naznačuje, že lakázou katalyzovaná polymerace přírodních fenolů může být využita při vývoji nových kosmetických pigmentů (Jeon et al. 2010). V testech slupek a semen vykazují extrakty ze slupek vyšší celkový obsah polyfenolů a antioxidační aktivitu (Kosińska et al. 2012). Při charakterizačních a kvantifikačních analýzách pomocí HPLC-ESI-MS/MS byly nejvyšší hodnoty antioxidační aktivity v jedlých částech plodů araticum ve slupce, následovala dužina a poté semena (Arruda et al. 2017). Při testech slupek kakaových bobů s použitím ošetření horkou vodou vznikly při ošetření při 170 °C po dobu 30 min extrakty bohaté na antioxidanty fenol, cukr a obromin (Hernández-Hernández et al. 2018). Podle výsledků různých analýz, například LC-MS/MS a GC/MS, jsou slupky Artocarpus heterophyllus (A. hererophyllus) dobrým zdrojem přírodních antioxidantů a dalších fyziologicky aktivních látek včetně katechinů (Sharma et al. 2013). Ořechy Sapucaia a jejich vedlejší produkty jsou bohaté na fenolické sloučeniny, které mají vysokou antioxidační aktivitu. Obsah fenolu je vysoký zejména ve skořápce (Demoliner et al. 2018). V jiné studii byla zkoumána antioxidační aktivita vláken kůry čtyř kultivarů kokosových ořechů a byly potvrzeny fenolové složky a antioxidační aktivity kokosových skořápek (Oliveira et al. 2013).

Stabilita

Katechiny mají vysokou antioxidační aktivitu a chrání pokožku před slunečním UV zářením. Probíhá mnoho studií zaměřených na stabilizaci katechinů, které jsou na slunečním světle velmi nestabilní. Přidáním kyseliny α-lipoové ke katechinům lze získat účinný antioxidant stabilizací EGCG (Scalia et al. 2013). Při hodnocení kompatibility katechinů a pomocných látek běžně používaných pro mikro- a nanoemulze v doplňkových a tepelných testech je třeba pečlivě sledovat složky. Zejména u přípravků obsahujících liposomy je třeba se vyhnout tepelným výrobním procesům (Ferreira-Nunes et al. 2018). Flavonoidy, alkaloidy a fenolové kyseliny v zubních pastách ze zeleného čaje byly analyzovány z hlediska stability při různých úrovních pH a byly stabilnější při nízkém pH (Jang et al. 2014). Fotostabilita EGCG byla zkoumána za stejných podmínek s použitím ve vodě rozpustného UVB filtru, benzofenonu-4 (BP-4). Výsledky ukázaly, že fotostabilita je závislá na koncentraci; maximální úrovně fotostabilizace EGCG (ztráta katechinu, 29,4 ± 2,2 %) bylo dosaženo v přítomnosti 2,1 % (w/w) BP-4 (Bianchi et al. 2011). Studie stabilizace kolagenu na bázi katechinu ukázala, že hydrofobní interakce a interakce vodíkové vazby ovlivňují stabilizaci kolagenu rostlinnými polyfenoly (Madhan et al. 2005). Extrakty z C. decapetala mají antioxidační vlastnosti díky fenolickým sloučeninám v listech. V koncentraci 0,2 % snižovaly extrakty z C. decapetala oxidační degradaci emulze olej ve vodě (Gallego et al. 2017).

Model tkáňové bioptické kultury

Výsledky aplikace katechinů in vivo nejsou stejné jako výsledky in vitro. Modely tkáňových biokultur hrají cennou roli tím, že ve studiích katechinů nahrazují pokusy na zvířatech. Aby se prokázal princip, že proteiny a klíčové genové markery mohou být změněny v optimalizovaném modelu biokultury celé tkáně, byly na modelu biokultury kůže zkoumány lokální přípravky obsahující katechiny zeleného čaje (Sidgwick et al. 2016). EpiDerm má antioxidační vlastnosti jako živé organismy a dokáže eliminovat oxidační stresové faktory způsobené EGCG v experimentálních podmínkách in vitro (Yuki et al. 2013). V experimentu s použitím buněk HaCaT a RBL-2H3 byla objektivně prokázána bezpečnost a protizánětlivý účinek nanoenkapsulovaných extraktů z listů zeleného čaje rozpustných v lipidech metodou superkritické extrakce CO2 (Shin et al. 2019).

Bezpečnost pro použití u člověka

Ačkoli jsou přírodní extrakty účinné jako antioxidanty a antimikrobiální látky, měla by být zajištěna bezpečnost katechinů při skutečném použití u člověka. Studie bezpečnosti katechinů byly prováděny v pokusech na zvířatech a v klinických testech na lidech. Propionidin B-2 podporuje růst vlasů a je třeba provést studie bezpečnosti pro použití u lidí. Lokální prokyanidin B-2 byl v řadě testů toxicity bezpečný a přijatelný. Testy mutagenity na morčatech, bakteriích a králících ukázaly, že prokyanidin B-2 není mutagenní (Takahashi et al. 1999). Při charakterizaci a studiích biokompatibility „zelených“ nanočástic stříbra s použitím polyfenolů zeleného čaje byly nanočástice stříbra netoxické a biokompatibilní (Moulton et al. 2010).

Antioxidační vlastnosti katechinů používané pro další aplikace

Kromě přímých antioxidačních aktivit jsou katechiny studovány za účelem zvýšení jejich využitelnosti v různých oblastech. Pro zvýšení rychlosti procesu barvení vlasů pomocí rostlinných produktů využívají polymerní barviva odvozená od fenolu z Trametes versicolor reakci lakázy s katechiny a katecholem k dosažení permanentního keratinového barviva na vlasy různých barev a odstínů (Im a Jeon 2016). Obalové materiály pro potraviny nebo aktivní membrány obsahující antioxidanty, jako jsou EGCG a EC odvozené od katechinu, představují nový způsob, jak snížit oxidaci potravin, kosmetiky a léčiv pomocí biopolymerních materiálů. Antioxidační aktivita fólie byla měřena odstraněním methanolových extraktů obsahujících katechiny a EC a jejich množství bylo 32,90 % a 36,68 % (Iñiguez-Franco et al. 2012). Kyselina tříslová, EGCG a ECG byly vázány na kolagen rozsáhlou vodíkovou vazbou umocněnou hydrofobními interakcemi. Zabraňovaly volnému přístupu kolagenázy k aktivním oblastem v kolagenových řetězcích (Jackson et al. 2010).

Synergické účinky podle metody a procesu extrakce

Bylo učiněno mnoho pokusů o zlepšení účinnosti a využití katechinů a o účinné uplatnění jejich antioxidačních vlastností v lidském organismu. Antioxidační a UV-bariérové vlastnosti molekul lze využít pro kosmetické a dermatologické přípravky poté, co byla vyvinuta a ověřena selektivní metoda vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) pro hodnocení optimální účinnosti katechinů při vývoji lokálních přípravků (Ferreira-Nunes et al. 2017). Blízká infračervená spektroskopie (NIRS) byla navržena jako rychlý a nedestruktivní způsob měření obsahu tří hlavních fenolických látek (kyseliny kávové, (+)-katechinu a kyseliny chlorogenové) (Magalhães et al. 2016). Chemická modifikace antokyaninu a prokyanidinů na lipofilnější sloučeniny pomocí hmotnostní spektroskopie má výhodu ve zvýšení biologické dostupnosti v biologických matricích, protože se zvyšuje antioxidační aktivita na základě acylace prokyanidinu B4 nasycenými mastnými kyselinami (Cruz et al. 2015). Polyfenoly a kolagenní peptidy se mohou uplatnit při navrhování čirých produktů prostřednictvím tvorby agregátů laktoferinu (LF)-EGCG, které se ničí hlavně prostřednictvím konkurenčních mechanismů s molekulami EGCG (Yang et al. 2015a). Mechanismus a strukturní vlastnosti trojmocných agregátů LF a pektinu v multispektrální analýze ukazují, že intenzita fluorescence LF klesá, zatímco intenzita fluorescence EGCG se zvyšuje (Yang et al. 2015b). FTIR spektrální analýza potvrdila, že za samouspořádání nanočástic jsou zodpovědné vodíkové vazby mezi alifatickými, katechinovými a aromatickými hydroxylovými skupinami na želatině. Při experimentech s volnými radikály mohly být katechiny chráněny nanočásticemi a vydržet delší dobu (Chen et al. 2010). Byla vyvinuta účinná, přesná a spolehlivá metoda kvantifikace polyfenolových katechinů a EC v roztoku extraktu aguarany pomocí metody HPLC-PDA (Klein et al. 2012). K porovnání celkového obsahu polyfenolů a flavonoidů v extraktech z lusků tara byla použita tři různá rozpouštědla a dvě extrakční metody. Celkový obsah polyfenolů byl nejvyšší při použití 75% ethanolového roztoku v hodinovém ultrazvukovém procesu a obsah flavonoidů byl nejvyšší při 24hodinové extrakci ve studené vodě. Vodní extrakty však byly účinné pouze v počátečních fázích oxidačního procesu, což ukazuje, že nejlepší metodou pro izolaci polyfenolů je 75% ethanolová extrakce (Skowyra et al. 2013). Asynergická studie mezi parametry procesu zjistila, že zvýšení procesu ošetření ultrazvukem výrazně urychluje výtěžnost fenolických antioxidantů a zkracuje dobu zpracování (Arruda et al. 2019). Procyanidinové extrakty z hroznových semen zabraňují poškození většiny tkání a molekul při ošetření nanočásticemi (Niu et al. 2017).

.