Katekiner har många fördelar, bland annat att förebygga eller minska hudskador. Katekiner är viktiga ingredienser från teblad och har intensiva antioxidativa och representativa fysiologiska aktiviteter. De tillhör gruppen polyfenolföreningar som finns i många medicinalväxter. De viktigaste källorna till katekiner är Camellia sinensis (C. sinensis) och C. assumica. Grönt te innehåller 75-80 % vatten och polyfenolföreningar (flavanoler, flavandioler, flavonoider och fenolsyra) (Zillich et al. 2015), och katekiner utgör mer än 75 % av polyfenolföreningarna i tebladen. De är tanniner av kondensationstyp med en ring och grundstrukturen flavan-3-ol. De har många kemiska strukturella egenskaper, t.ex. hydroxylgrupper (-OH), som lätt kombineras med andra material (Singh et al. 2011). Det finns åtta katekiner (figur 1): C ((-)-katechin), EC ((-)-epicatechin), ECG ((-)-epicatechingallat), EGC ((-)-epigallocatechin), EGCG ((-)-epigallocatechin-gallat), GC ((-)-gallocatechin), CG ((-)-catechingallat) och GCG ((-)-gallocatechingallat). De viktigaste typerna är EC, ECG, EGC och EGCG (Jin et al. 2006), som är framträdande i grönt te (Fung et al. 2012). Katekiner ger flera hälsofördelar genom att fånga upp fria radikaler och fördröja nedbrytningen av den extracellulära matrisen som induceras av ultraviolett (UV) strålning och föroreningar (Shi et al. 2016). Katekiner påverkar också direkt huden genom att aktivera kollagensyntesen och hämma produktionen av enzymer av matrismetalloproteinaser (Arct et al. 2003). På grund av hydroxilen i gallatgruppen är EGCG och ECG mycket effektiva fångar för fria radikaler jämfört med många andra vanliga antioxidanter, såsom askorbinsyra, tokoferol och trolox (Gulati et al. 2009; Matsubara et al. 2013; Kim et al. 2018). På grund av dessa användbara åtgärder används tekatekiner i allt större utsträckning i medicinska, farmaceutiska och kosmetiska produkter och studeras aktivt på olika sätt.

Figur 1
figur1

Strukturformel för åtta katekiner. Katekiner har många kemiska strukturella egenskaper, t.ex. hydroxylgrupper (-OH), som lätt kombineras med andra material. Det finns åtta katekiner: Det finns åtta katekiner: C ((-)-katechin), EC ((-)-epicatechin), ECG ((-)-epicatechingallat), EGC ((-)-epigallocatechin), EGCG ((-)-epigallocatechin-gallat), GC ((-)-gallocatechin), CG ((-)-catechingallat) och GCG ((-)-gallocatechingallat). Principtyperna är C, EC, ECG, EGC och EGCG

Antioxidant aktivitet

Catechiner är välstuderade ämnen med bevisad antioxidant effekt. Studier har genomförts för att öka katekinernas stabilitet och öka deras upptagningshastighet i människokroppen. Nya studier har fokuserat på att maximera effekten av antioxidanter. Gallussyra och katekiner uppvisar stabil antioxidantverksamhet genom syntes av galaktan, och katekiner som antioxidanter binder kovalent till proteinkedjor (Spizzirri et al. 2009). Caesalpinia decapetala (C. decapetala) är effektiv när det gäller oxidationsstabiliteten hos en olja-i-vatten-emulsion (Gallego et al. 2017). Analyser med hjälp av LC-ESI/LTQ Orbitrap/MS av autochton groddplantor från regionen Kampanien visade en högre nivå av antioxidativ aktivitet jämfört med icke-autochton groddplantor (D’Urso et al. 2018). Enzymatisk glukosylering av kaffesyra och EGCG leder till förbättrad antioxidativ förmåga i en cellulär modell av UV-inducerat hudåldrande (Nadim et al. 2014). Det flamboyanta trädet (Delonix regia) har potenta antioxidativa och antimikrobiella aktiviteter (Feng et al. 2014). EGCG:s antioxidativa kapacitet är effektiv mot H2O2-inducerad skada på humana dermal fibroblaster (Feng et al. 2013). Lipofiliserade EGCG-derivat uppvisar ökad antioxidativ aktivitet (Zhong och Shahidi 2011). Flavonoider och triterpenoider från frukten av Alphitonia neocaledonica har cytotoxicitet, antioxidant- och anti-tyrosinasaktivitet och är användbara kosmetiska ingredienser (Muhammad et al. 2014). Cirka 106 fenolföreningar har hittats med hjälp av vätskekromatografianalyser kopplade till elektrosprayjonisering för snabb profilering av fenolföreningar från blad av rödlönn (Acer rubrum) (Li och Seeram 2018). Bambusstammextrakt har visat antimelanogena och antioxidativa aktiviteter i ett cellfritt system och B16F10 melanomceller (Choi et al. 2018). Etanolextraktet från marulaträdet är mycket effektivt för att öka aktiviteterna in vitro. ECG och EGCG i marulaträdsextraktet bidrar till anti-ageing-aktiviteter (Shoko et al. 2018). Cocos nucifera bark visade antioxidativa och antidepressiva aktiviteter genom oxidativa förändringar i den prefrontala cortexen (Lima et al. 2016).

UV-skyddsaktivitet

Extensiva studier av katekinernas skyddande förmåga mot UV-strålning har visat att katekiner har förmågan att öka fotostabiliteten och skyddet av huden mot UV-strålar. Studier har också genomförts för att hitta effektiva användningsområden för katekiner inom olika områden, t.ex. förebyggande av hudens åldrande, genom att öka deras effektivitet och stabilitet. Katekiner förbättrar stabiliteten hos EGCG nanoethosomala suspensioner för att öka effektiviteten för att hämma UVB-inducerade hudskador (Zhang et al. 2016). Emulgering av katekiner ökar permeationen i huden, skyddsförmågan mot UV-strålar och anti-ageing-effekter (Yoshino et al. 2013). Olika analyser, inklusive3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromid (MTT) och Western blot-analyser, visar att ECG är ett kraftfullt botemedel mot UVB-inducerade skador på HaCaT keratinocyter (Huang et al. 2007). Exponering för simulerad solstrålning med solskyddssorbenter visade att druvkärneextrakt har ett bredspektrumskydd på grund av sin höga fotostabilitet och en rödförskjutning över hela UVA- och UVB-strålindexet (Martincigh och Ollengo 2016). Flavonoider visar hög ljus- och värmestabilitet vid konservering och frisättning av metakrylsyragraftat poly (N-vinylpyrrolidon) syragraftat (N-vinylpyrrolidon) (Parisi et al. 2012). Den hämmande aktiviteten mot svamptyrosinas av komponenter som isolerats från Neolitsea aciculate visar att denna växt skulle kunna vara en källa till antimelaninproducerande ämnen (Kim et al. 2012). Odlade UV-inducerade mänskliga keratinocyter behandlades med EGCG, och effekterna på inflammatoriska vägar och kärntranslokation av transkriptionsfaktorn NF-κB bedömdes. EGCG hämmade UVB- och UVA-inducerade inflammatoriska vägar och apoptos i odlade mänskliga keratinocyter (Xia et al. 2005).

Antimikrobiell aktivitet

Forskning pågår för att framställa biologisk och funktionell kosmetik med hjälp av de naturliga antimikrobiella egenskaperna hos katekiner. Celexperiment med mänskliga epiteliala KB-celler visar attflavan-3-oler och proanthocyanidin från Limonium brasiliense (L. brasiliense) interagerar med gingipainer för att hämma vidhäftningen av Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) till epiteliala värdceller (de Oliveira et al. 2017). I studier av den antimikrobiella aktiviteten hos fulleren och dess hydroxylerade derivat var C60 (OH)44 lika potent och brett verksamt som katekin, som användes som kontroll vid utvärderingen (Aoshima et al. 2009). Extrakt av grönt te minskade signifikant nivåerna av Streptococcus mutans (S. mutans) i saliv och tandplack hos barn (Goyal et al. 2017).

Antiallergena och antiinflammatoriska aktiviteter

Allergier orsakas av en överaktiv reaktion från immunförsvaret, vilket ger klåda och inflammation. Kontakt med vissa allergener leder till ett känsligt tillstånd. Studier har utförts om katekins antiallergiska aktivitet. De antiallergena komponenterna i oolongteeträdet och katekinernas hämmande aktivitet på histamin som frigörs från peritoneala mastceller från råttor som passivt sensibiliserats med IgE-antikropp mot äggalbumin har undersökts. GCG var den mest potenta antiallergena komponenten bland tekatekinerna (Ohmori et al. 1995). Extrakt av Acerola bagasse (A. bagasse) kan modulera aktiviteten hos proteaser som verkar på koagulerande, antikoagulerande och trombolytiska aktiviteter samt destruktion av fosfolipider, vilket minskar inflammation och trombocytaggregation (Marques et al. 2018). Metanolutdrag från stambarken av Vitellaria paradoxa (V. paradoxa) visade antiinflammatoriska och antiartritiska aktiviteter vid akut och kronisk inflammation hos Wistar-albinoråttor (Foyet et al. 2015). Klorhexidin och extrakt av grönt te minskade korrosion och slitage av dentin. Vissa matrixmetallproteashämmare kan vara en förebyggande åtgärd för att förhindra dentinerosion-abrasion (Magalhães et al. 2009).

Antiviral och anti-canceraktivitet

Många studier har utförts om förebyggande och behandling av virusinfektioner (mässling, aids, vattkoppor, SARS, MERS, ebola, etc.). En experimentell studie visade att katechiner från grönt te har en anti-influensavirusaktivitet (Ide et al. 2014). Ent EC-(4alpha→8) EC (Ent-Epiafzelechin-(4alpha -> 8) -epiafzelechin från Cassiajavanica påverkade inte cellens livsduglighet och proliferation men störde herpes simplex-virusets cellpenetration och adhesion (Cheng 2006). I kliniska försök förändrade gurgling med grönt te tre gånger om dagen inte hastigheten för insjuknande i influensaviruset. Forskarna föreslog att det behövs ytterligare studier av katekins antivirala aktiviteter (Ide et al. 2014). Studier har funnit anti-cancersubstanser i växter som hämmar cancercellsspridningen, bland annat katekiner. Polyfenolrika extrakt från Lawsonia inermis (L. inermis) L. (Henna) hämmar oxidativa radikaler och cancercellproliferation (Kumar et al. 2016).

Aktivering av passage av hudbarriären

Katekiner har en utmärkt antioxidativ aktivitet, men deras höga molekylvikt och bindning till hudens lipiddubbelskikt är hinder för att passera hudbarriären. Det har gjorts många försök att övervinna detta problem. Mikronålsmedierad intradermal leverans gör det möjligt för EGCG att tränga in i djupare hudlager. Mikroporering av huden med maltosmikronålar underlättar penetrationen av EGCG genom stratum corneum till de djupare hudlagren, inklusive den livskraftiga epidermis och dermis (Puri et al. 2016). Baserat på användning av olje-vattenemulsioner med olika oljeinnehåll genomträngde en blandning av polyfenoler som innehåller katekiner med hjälp av diffusionsceller av Franz-typ epidermis och dermis i grishud in vitro (Zillich et al. 2013). Hydrofila tillsatser minskar flavonoidernas aktivitet genom att öka deras löslighet. Hudpenetration av flavonoider från druvbladsextrakt samtrutin, quercetin och katekiner sker genom lipofila membran (Arct et al. 2002). EGCG, quercetin, 14-EGCG och Ginkgo biloba-extrakt visar utmärkt hudpenetration i färsk vit hud från bukkirurgi på statiska spridningsceller av Franz-typ (dal Belo et al. 2009). Monoglycerolester (MGE)-liquid crystal (LC)-formande lipider och glycerolmonoolat (GMO)-LC-formuleringar har förbättrad hudpenetration på grund av läkemedlets olika fysikalisk-kemiska egenskaper. MGE-formuleringar har lägre viskositet, snabbare frisättning av läkemedel och bättre hudpermeabilitet än GMO-formuleringar. Den låga viskositeten hos MGE-LC-preparaten kan påverka läkemedelsdiffusionen och permeabiliteten genom huden (Kadhum et al. 2017). Liposomer kan aktivt passera hudskikt genom konstgjorda fosforlipidmembran. Fosfolipider har en enastående affinitet för vissa grupper av flavonoider, och en blandning av katekiner och fytosomer, ett komplex av naturligt aktiva komponenter och fosfolipider (främst lecitin), förbättrar hudens elasticitet (Bombardelli 1991). Interaktionen mellan fiskkollagenpeptid (FCP) och EGCG analyserades med hjälp av spektroskopiska tekniker, t.ex. fluorescensspektrumskopi, cirkulär dikroism och infraröd spektroskopi med Fouriertransform (FTIR). Mer exponering av prolin hittades när FCP-EGCG-komplex bildades. FCP fungerar som en förstärkare av EGCG och ökar absorptionen av EGCG i huden och kroppen (Yang et al. 2015c). Chitosanmikropartiklar som innehåller extrakt av grönt te visar permeation av katekiner till subkutana vävnader, och metabolismstudier visar att chitosanmikropartiklar förbättrar den subkutana leveransen av katekiner samtidigt som de begränsar deras nedbrytning av hudenzymer (Wisuitiprot et al. 2011).

Promotion av cellaktivitet

Effekterna av naturliga extrakt, inklusive katekiner, på cellaktivitet har studerats utförligt. Extrakt av svart, grönt och vitt te har anti-melanogena aktiviteter i omortaliserade melanocyter. Fermenterade teblad har den lägsta cytotoxiciteten och de högsta anti-melanogena aktiviteterna (Kim et al. 2015). EGCG minskade utsöndringen och produktionen av melanin i mänskliga melanomceller i en mekanistisk studie som främjar hudens återfuktning och som mätte antioxiderande och pigmenteringsegenskaper. EGCG ökar genuttrycket för hyaluronsyrasyntas och cellproliferation (Kim et al. 2018). EGCG-5′-O-α-glukopyranosid (EGCG-5′Glu), ett EGCG-derivat, har antioxidativa effekter i både cellfria och cellulära system. EGCG-5′Glu återställer reaktiva syrearter (ROS)-medierad cellviabilitet, reglerar caspaser och cellöverlevnadsmolekyler och ökar cellproliferationen genom att modulera NF-κB-aktiviteten (Han et al. 2018).

Slamutnyttjande

Slamutnyttjande med högt förädlingsvärde inom läkemedel, kosmetika och livsmedel har gjort stora framsteg. Tannin, ett extrakt av fast avfall som produceras i industriella processer för kastanjer, är en effektiv naturlig antioxidant för kosmetika-, livsmedels- och läkemedelsindustrin (Aires et al. 2016). Använd kaffesump är en stor källa till bioaktiva föreningar av intresse för kosmetika- och läkemedelsindustrin, och metylantiner och fenoler är hälsorelaterade föreningar som finns i använd kaffesump. FTIR har använts för att utvärdera användbara aktiva ingredienser i begagnad kaffesump (Magalhães et al. 2016). Identifiering och kvantifiering av fenoliska föreningar och radikalavskiljande aktiviteter hos de två biprodukterna från Vitis vinifera L. cv noir visade att de har hög potential som antioxidanter (Reis et al. 2016). Procyanidiner, som består av katekinoligomerer, fungerar i antioxidantaktivitet, metallkelering, radikalfångst och direkt enzymbindning. Baserat på dessa resultat binder procyanidinoligomerer starkt till permanenta keratinhår och hämmar hårförstöring orsakad av oxidativ skada (Kim 2011). Laccase katalyserar polymeriseringen av fenolföreningar, vilket tyder på att laccasekatalyserad polymerisering av naturliga fenoler kan användas för utveckling av nya kosmetiska pigment (Jeon et al. 2010). I skal- och frötester visar skalutdragen högre total polyfenolhalt och antioxidativ aktivitet (Kosińska et al. 2012). I karaktäriserings- och kvantifieringsanalyser med hjälp av HPLC-ESI-MS/MS fanns de högsta nivåerna av antioxidativ aktivitet i de ätliga delarna av araticumfrukterna i skalet, följt av fruktköttet och därefter fröna (Arruda et al. 2017). I tester av skal från kakaobönor med hjälp av varmvattenbehandling producerades antioxidantrika extrakt av fenol, socker och obromin när de behandlades vid 170 °C i 30 minuter (Hernández-Hernández et al. 2018). Artocarpus heterophyllus (A. hererophyllus) skal är en bra källa till naturliga antioxidanter och andra fysiologiskt aktiva ämnen, inklusive katekiner, enligt resultaten av olika analyser, såsom LC-MS/MS och GC/MS (Sharma et al. 2013). Sapucaia-nötter och deras biprodukter är rika på fenolföreningar som har hög antioxidativ aktivitet. Fenolhalten är särskilt hög i skalet (Demoliner et al. 2018). I en annan studie undersöktes den antioxidativa aktiviteten hos barkfibrerna från fyra kokosnötssorter, och de fenoliska komponenterna och den antioxidativa aktiviteten hos kokosnötsskalet bekräftades (Oliveira et al. 2013).

Stabilitet

Katekiner har hög antioxidativ aktivitet och skyddar huden mot solens UV-strålar. Många studier pågår för att stabilisera katekiner, som är mycket instabila i solljus. Tillsats av α-liponsyra till katekiner kan ge en effektiv antioxidant genom att stabilisera EGCG (Scalia et al. 2013). Komponenterna bör övervakas noga när man utvärderar kompatibiliteten hos katekiner och hjälpämnen som vanligen används för mikro- och nanoemulsioner i kompletterande och termiska analyser. Särskilt för preparat som innehåller liposomer bör värmebaserade produktionsprocesser undvikas (Ferreira-Nunes et al. 2018). Flavonoider, alkaloider och fenolsyror i tandkräm av grönt te analyserades för stabilitet vid olika pH-nivåer och var mer stabila vid lågt pH (Jang et al. 2014). EGCG:s fotostabilitet undersöktes under samma förhållanden med hjälp av ett vattenlösligt UVB-filter, bensofenon-4 (BP-4). Resultaten visade att fotostabiliteten var koncentrationsberoende; den maximala nivån av EGCG-fotostabilisering (katekinförlust, 29,4 ± 2,2 %) uppnåddes i närvaro av 2,1 % (w/w) BP-4 (Bianchi et al. 2011). En studie av katekinbaserad kollagenstabilisering visade att hydrofoba interaktioner och vätebindningsinteraktioner påverkade kollagenstabiliseringen av växtpolyfenoler (Madhan et al. 2005). C. decapetala-extrakt har antioxidativa egenskaper på grund av fenolföreningarna i bladen. Vid en koncentration på 0,2 % minskade C. decapetala-extrakt den oxidativa nedbrytningen av en olja-i-vatten-emulsion (Gallego et al. 2017).

Tissue biopsy culture model

Resultaten av in vivo-tillämpningar av katekiner är inte desamma som in vitro-resultaten. Vävnadsbiokulturmodeller spelar en värdefull roll genom att ersätta djurförsök i studier av katekiner. För att bevisa principen att proteiner och viktiga genmarkörer kan förändras i en optimerad helvävnadsbiopsiodlingskulturmodell undersöktes topiska formuleringar som innehåller katechiner från grönt te i en hudbiopsiodlingskulturmodell (Sidgwick et al. 2016). EpiDerm har antioxidativa egenskaper som liknar dem hos levande organismer och kan eliminera oxidativa stressfaktorer orsakade av EGCG under experimentella in vitro-förhållanden (Yuki et al. 2013). I ett experiment med HaCaT- och RBL-2H3-celler bevisades objektivt säkerheten och den antiinflammatoriska effekten av nanoinkapslade lipidlösliga extrakt av grönt te-blad med hjälp av den superkritiska CO2-extraktionsmetoden (Shin et al. 2019).

Säkerhet för tillämpning på människor

Och även om naturliga extrakt är effektiva som antioxidanter och antimikrobiella medel bör katekinernas säkerhet säkerställas i faktiska tillämpningar på människor. Studier av katekinernas säkerhet har genomförts i djurförsök och kliniska tester på människor. Propionidin B-2 främjar hårväxt, och det behövs säkerhetsstudier för användning på människor. Lokal procyanidin B-2 var säker och acceptabel i en serie toxicitetstester. Mutagenicitetstester med marsvin, bakterier och kaniner visar att procyanidin B-2 inte är mutagent (Takahashi et al. 1999). I karaktäriserings- och biokompatibilitetsstudier av ”gröna” silvernanopartiklar med hjälp av polyfenoler från grönt te var silvernanopartiklarna icke-toxiska och biokompatibla (Moulton et al. 2010).

Antioxidativa egenskaper hos katekiner som används för andra tillämpningar

Inom sina direkta antioxidativa aktiviteter studeras katekiner för att öka deras användbarhet inom olika områden. För att öka hastigheten på hårfärgningsprocessen med hjälp av växtprodukter använder fenolbaserade polymera färgämnen från Trametes versicolor en laccasreaktion med katekiner och katekol för att uppnå en permanent keratinhårfärgning i olika färger och nyanser (Im och Jeon 2016). Livsmedelsförpackningsmaterial eller aktiva membran som innehåller antioxidanter, t.ex. catechinderivat EGCG och EC, är ett nytt sätt att minska oxidationen av livsmedel, kosmetika och läkemedel med hjälp av biopolymermaterial. Filmens antioxidativa aktivitet mättes genom avlägsnande av metanolextrakt innehållande katekiner och EC, och deras mängder var 32,90 % respektive 36,68 % (Iñiguez-Franco et al. 2012). Tanninsyra, EGCG och ECG var bundna till kollagen genom omfattande vätebindning förstärkt av hydrofoba interaktioner. De förhindrade kollagenasets fria tillgång till de aktiva områdena i kollagenkedjorna (Jackson et al. 2010).

Synergistiska effekter av metoden och processen för extraktion

Många försök har gjorts för att förbättra effektiviteten och utnyttjandet av katekiner och för att effektivt tillämpa deras antioxidativa egenskaper i människokroppen. Molekylernas antioxidativa och UV-barriäregenskaper kan användas för kosmetiska och dermatologiska formuleringar efter att en selektiv högpresterande vätskekromatografimetod (HPLC) har utvecklats och verifierats för att utvärdera den optimala effekten av katekiner vid utveckling av topiska formuleringar (Ferreira-Nunes et al. 2017). Nära-infraröd spektroskopi (NIRS) har föreslagits som ett snabbt och icke-destruktivt sätt att mäta innehållet av de tre viktigaste fenolerna (koffeinsyra, (+)-katekin och klorogensyra) (Magalhães et al. 2016). Kemisk modifiering av antocyanin och procyanidiner till mer lipofila föreningar genom masspektroskopi har fördelen att öka biotillgängligheten i biologiska matriser eftersom antioxidationsaktiviteten ökar baserat på acylering av procyanidin B4 med mättade fettsyror (Cruz et al. 2015). Polyfenoler och kollagenpeptider kan tillämpas på utformningen av klara produkter, via bildandet av laktoferrin (LF)-EGCG-aggregat, som förstörs främst genom konkurrensmekanismer med EGCG-molekyler (Yang et al. 2015a). Mekanismen och de strukturella egenskaperna hos trivalenta aggregat av LF och pektin i en multispektral analys visar att fluorescensintensiteten hos LF minskar medan den hos EGCG ökar (Yang et al. 2015b). FTIR-spektralanalysen bekräftade att vätebindningarna mellan de alifatiska, katekin- och aromatiska hydroxylgrupperna på gelatin var ansvariga för självmonteringen av nanopartiklar. I experiment med fria radikaler kunde katekiner skyddas av nanopartiklar och hålla under en längre tid (Chen et al. 2010). En effektiv, exakt och tillförlitlig metod utvecklades för att kvantifiera polyfenolkatekiner och EC i aguaraná-extraktlösning med hjälp av en HPLC-PDA-metod (Klein et al. 2012). Tre olika lösningsmedel och två extraktionsmetoder användes för att jämföra det totala polyfenol- och flavonoidinnehållet i extrakt från tara pods. Den totala polyfenolhalten var högst när en 75 % etanollösning användes i en timslång ultraljudsprocess, och flavonoidhalten var högst när den extraherades i 24 timmar i kallt vatten. Vattenextrakt var dock effektivt endast i de tidiga stadierna av oxidationsprocessen, vilket visar att 75 % etanolextraktion är den bästa metoden för isolering av polyfenoler (Skowyra et al. 2013). En asynergistisk studie mellan processparametrar visade att förstärkning av ultraljudsbehandlingsprocessen avsevärt påskyndar återvinningen av fenoliska antioxidanter och minskar behandlingstiden (Arruda et al. 2019). Procyanidin-extrakt från druvkärnor förhindrar skador på de flesta vävnader och molekyler från behandling med nanopartiklar (Niu et al. 2017).