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DISCUSSÃO

Considerando que os animais foram alojados em armários de isolamento de transmissão de doenças, a recuperação de S. Agonanal+ e S. Typhimuriumnal+ de leitões sentinela nos ensaios dá evidência de que tais patógenos podem ser propagados através do ar e infectar leitões desmamados a uma curta distância. Além disso, a macrorestricção do DNA cromossômico e o perfil plasmídeo dos isolados recuperados de porcos sentinela e inoculados em cada ensaio mostrou padrões indistinguíveis em comparação com a respectiva linhagem utilizada como inóculo (dados não mostrados). Isto foi suficiente para rejeitar a hipótese nula e, portanto, outras análises estatísticas não foram tentadas. Estes achados confirmam indicações anteriores sobre a possibilidade de transmissão por via aérea de S. enterica em suínos. Além disso, a transmissão por aerossol de S. enterica já foi demonstrada em aves, bezerros, ovelhas e ratos .

Embora experimentos similares tenham sido realizados para testar a transmissão por via aérea de outros patógenos em suínos, o presente relatório é, de acordo com nosso conhecimento, o primeiro a descrever a transmissão por via aérea de S. enterica em suínos utilizando armários de isolamento.

Amostras de esfregaços retais individuais foram realizadas para determinar quando os suínos começaram a descartar Salmonella. De acordo com nossos resultados, a Salmonella foi isolada dos porcos inoculados em ambos os ensaios no início do primeiro dia pós-infecção (Tabelas 1 e 2), o que está de acordo com relatos anteriores sobre a rápida disseminação da Salmonella após a inoculação experimental.

No ensaio I, um porco sentinela (P6) mostrou um padrão consistente de disseminação de S. Agonanal+ entre 11 e 15 DPI. No Ensaio II, no entanto, S. Typhimurium foi isolado de P11 a 5 DPI detectado apenas por PCR em esfregaços rectos de P12 a 2, 5 e 18 DPI. No único relatório disponível sobre a transmissão por via aérea de S. Typhimurium em suínos, nenhuma bactéria foi isolada de animais sentinela expostos ao fluxo de ar de uma sala com suínos infectados e apenas foi observada seroconversão .

Apesar da grande variação de tempo e frequência de descamação de Salmonella que é observada em suínos expostos, S. Typhimurium pode ser rapidamente isolado de fezes logo após serem misturados com animais descamando este patógeno , ou quando são colocados em um ambiente contaminado . No entanto, quando os porcos infectados e sentinela tiveram apenas contato do nariz com o nariz, a maioria dos porcos expostos solta S. Typhimurium após 5 semanas . Estes achados podem apoiar a hipótese de que fezes contaminadas são uma fonte importante de contaminação cruzada entre currais .

A recuperação de S. Agonanal+ de amostras de ar coletadas na entrada de C3 durante quatro dias consecutivos no Teste I apóia a suposição de que suínos sentinela adquiriram a infecção após receberem ar contaminado de C2. O fato de S. Typhimuriumnal+ não ter sido recuperado de amostras de ar no Ensaio II não refuta a hipótese de transmissão por via aérea. Embora o ágar verde brilhante tenha sido considerado como dando resultados superiores aos de outros meios seletivos no isolamento de Salmonella de amostras de ar, deve-se lembrar que o isolamento de bactérias patogênicas específicas do ar ambiental em instalações animais é sempre difícil, e os resultados são freqüentemente negativos para contaminação extensiva por microrganismos saprófitos .

Considerando as 387 amostras que foram analisadas tanto pelo isolamento quanto pela PCR, houve concordância substancial entre os dois testes. O coeficiente kappa (0-77) aqui encontrado confirma o uso bem sucedido do caldo enriquecido de Rappaport-Vassiliadis como fonte de modelo de DNA para PCR como um método adicional para melhorar a sensibilidade de detecção de Salmonella em amostras fecais de suínos. Tem sido sugerido que o enriquecimento permite a diluição de substâncias inibitórias e também aumentar o número de salmonelas nas fezes . Dezanove amostras foram positivas por PCR e negativas por isolamento, enquanto 21 amostras foram positivas por isolamento e negativas por PCR. Estes resultados discrepantes e o fato de que o isolamento de bactérias é necessário para confirmar a hipótese de transmissão em ensaios experimentais sugerem que o cultivo de caldo de enriquecimento por PCR pode ser usado apenas como uma ferramenta de diagnóstico de suporte, e não como substituto do isolamento bacteriano.

O desenho experimental usado aqui não permite conclusões sobre os locais de invasão de Salmonella nos suínos sentinela. A frequência de recuperação de Salmonella em ambos os testes, ou seja, a rápida contaminação ambiental em C3 antes da identificação de descargas de Salmonella por suínos sentinela, pode sugerir que estes animais adquiriram Salmonella por ingestão, provavelmente de superfícies ambientais contaminadas por aerossóis de C2, incluindo ração. Esta hipótese é suportada pelo fato de que suínos em idade de abate podem ser rapidamente infectados quando expostos a números relativamente baixos de S. Typhimurium no ambiente .

Por outro lado, a hipótese de inalação de Salmonella por suínos sentinela não pode ser excluída. Usando porcos esofagotomizados, Fedorka-Cray et al. mostraram que S. Typhimurium pode rapidamente acumular-se no intestino por outras vias que não a clássica via oral de inoculação e elucidaram a importância do NALT como um importante portal de entrada de S. Typhimurium em porcos. Estes tecidos também podem constituir importantes locais de invasão a bactérias presentes em partículas de alimento e fezes, uma vez que o comportamento dos suínos garante que tais partículas geralmente entram na cavidade nasal durante a alimentação e enraizamento .

Interessantemente, o isolamento do S. Agonanal+ de amostras de pulmão e fígado de P6, bem como tecidos do trato digestivo, são sugestivos de infecção sistêmica. Infecções sistêmicas em suínos têm sido frequentemente documentadas em experimentos utilizando a via respiratória intranasal de inoculação, mas não têm sido geralmente descritas em experimentos utilizando exposição oral. A sequência de exposição, ou seja, oral-respiratória vs. respiratória-oral, também pode afetar a resposta imunológica, que por sua vez pode afetar a gravidade da doença .

As diferenças em idade animal, origem animal, umidade média e temperatura não permitem comparações diretas entre os dois experimentos. A diferença mais importante entre as duas experiências reside no diferente estado imunológico dos animais antes da inoculação (Tabela 4). A média do MCOD em animais da fazenda A (Prova I) foi de apenas 0-056, enquanto foi de 0-187 em animais da fazenda B (Prova II). Três animais da prova II (P7, P8 e P9) apresentaram um MCOD superior ao valor de corte padrão para o teste (0-169), o que indica a presença de anticorpos maternos contra a Salmonella. Apesar de S. Typhimuriumnal+ ter sido isolado de tecidos coletados de um porco sentinela (P12) no Ensaio II, a presença de imunidade lactogênica poderia explicar a ausência de descamação de Salmonella pelos porcos sentinela durante todo o período experimental. De facto, a presença de anticorpos maternos contra a Salmonella pode proteger os leitões durante as primeiras semanas .

Dois porcos sentinela (P6 e P12) mostraram títulos aumentados de anticorpos contra a Salmonella. Estes resultados corroboram os achados anteriores na detecção da resposta imune humoral após exposição a aerossóis em porcos .

Diminuição de um metro observada em porcos infectados no Ensaio II pode ser devido ao esgotamento dos anticorpos maternos após o desafio. Curiosamente, os porcos infectados no ensaio I não mostraram um aumento acentuado dos títulos de anticorpos. Tal baixa resposta serológica poderia ser atribuída à idade relativamente baixa dos porcos e ao período experimental relativamente curto. Na verdade, a seroconversão tem mostrado variar substancialmente entre porcos inoculados (6-37 dias) e a seroconversão geralmente atinge picos em torno de 30 DPI . Em suínos naturalmente infectados, este intervalo de tempo entre a infecção e a seroconversão pode ser ainda maior .

A falta de conhecimento e a complexidade da epidemiologia da Salmonella nos sistemas modernos de produção de suínos são considerados como os maiores problemas para controlar estas bactérias nas granjas. Numerosos relatórios sobre o impacto da nutrição, sistemas de produção, manejo e estratégias de transporte/lairagem na redução de Salmonella em suínos têm sido publicados e o ciclo fecal-oral da infecção é geralmente tomado como base para a análise epidemiológica. Por outro lado, tem sido dada pouca atenção à propagação, contaminação e infecção por Salmonella através de aerossóis em suínos. Se esta via de transmissão também pode ou não ser motivo de preocupação na epidemiologia da Salmonella em sistemas de produção intensiva de suínos, ainda está por esclarecer. Em aves de capoeira, entretanto, já foi demonstrado que aerossóis contaminados desempenham um papel importante na transmissão de Salmonella e métodos para reduzir os níveis de poeira aerossolizada têm sido aplicados com sucesso para diminuir a transmissão deste patógeno em cabines de incubação e instalações de criação de frangos de corte .

Neste sentido, melhorias ambientais e de manejo com foco na redução de aerossóis podem desempenhar um papel importante na prevenção da infecção por Salmonella em suínos também. A fim de reduzir a transmissão de doenças transmitidas pelo ar em suínos, o volume de ar por animal, bem como as taxas de ventilação e umidade devem ser adequadas, e altas densidades de animais de criação e movimentação excessiva de animais devem ser evitadas. Vale notar que tais medidas não só diminuem os aerossóis infecciosos, mas também contribuem para diminuir o estresse animal. Além disso, a pulverização de óleo ou de uma mistura de óleo e água no ambiente pode reduzir eficazmente as concentrações de pó nos estábulos de suínos. Finalmente, como a alimentação é a principal fonte de poeira no ar, as estratégias de alimentação também devem ser consideradas como opções para reduzir a poeira nos galpões. A alimentação com líquidos fermentados tem sido associada à diminuição da prevalência de Salmonella em suínos, provavelmente como resultado do efeito combinado de grandes quantidades de ácidos orgânicos e grande número de bactérias produtoras de ácido láctico presentes nestas rações. Por outro lado, a redução da produção de pó quando se utiliza este método de alimentação também deve ser considerada.

Em conclusão, é possível a transmissão aérea de curta distância de S. Agona e S. Typhimurium em leitões desmamados. Outros estudos sobre o impacto do aerossol e redução de poeira no controle de Salmonella em sistemas de criação intensiva de suínos devem ser conduzidos.