Efeito Antigenotóxico dos Trametes spp. Extractos contra Danos de DNA nas Células Brancas Periféricas Humanas

Abstract

As espécies de Trametes são usadas há milhares de anos na medicina tradicional e convencional para o tratamento de vários tipos de doenças. O objetivo era avaliar possíveis efeitos antigenotóxicos de extratos de micélio e basidiocarpo de espécies selecionadas de Trametes e avaliar a dependência do seu potencial antioxidante. Trametes versicolor, T. hirsuta, e T. gibbosa foram as espécies estudadas. Os potenciais antigenotóxicos dos extratos foram avaliados nos glóbulos brancos periféricos humanos com extratos de basidiocarpo e micélio das espécies. O teste do cometa alcalino foi usado para a detecção de quebras de fios de DNA e locais alcalino-lábeis, assim como a extensão da migração do DNA. O ensaio DPPH foi utilizado para estimar as propriedades antioxidantes dos extractos. Extratos de corpo frutífero de T. versicolor e T. gibbosa, assim como extratos de T. hirsuta, exceto que a 20,0 mg/mL, não eram agentes genotóxicos. O extrato de T. versicolor teve a 5,0 mg/mL o maior efeito antigenotóxico tanto no pré- como no pós-tratamento de leucócitos. Os extratos de micélio das três espécies não tiveram atividade genotóxica e efeito antigenotóxico significativo contra danos de DNA induzidos por H2O2, tanto no pré-tratamento quanto no pós-tratamento. Os resultados sugerem que extratos destas três espécies poderiam ser considerados como fortes agentes antigenotóxicos capazes de estimular a resposta genoprotetora das células.

1. Introdução

Os cogumelos têm sido usados há muito tempo como alimento, mas igualmente na medicina tradicional tanto do mundo ocidental como oriental. Embora numerosos cogumelos sejam reconhecidos como alimentos saudáveis , o seu grande potencial farmacológico ainda é subutilizado . Cerca de 60 espécies de Trametes são conhecidas por habitarem o mundo, mas apenas algumas delas são rastreadas pelas suas propriedades medicinais . Trametes versicolor (L.:Fr.) Lloyd é a espécie medicinal mais famosa do gênero. Esta espécie, cujos nomes populares são Turkey Tail nas culturas ocidentais, Yun-Zhi (cogumelo tipo nuvem) na China, ou Kawaratake (cogumelo à beira do rio) no Japão, tem sido usada há milhares de anos na medicina tradicional, particularmente na Ásia. De acordo com o Compêndio da Materia Medica chinesa, escrito durante a Dinastia Ming, mais de 120 cepas de T. versicolor foram registradas e na prática medicinal tradicional chinesa este cogumelo é considerado útil para remover toxinas, fortalecer, aumentar a energia, melhorar a função do fígado e do baço e melhorar a resposta imunológica, especialmente quando é seco, moído e preparado para o chá. Todas essas propriedades foram consideradas muito úteis na medicina popular para o uso crônico de preparações de Trametes spp. Na medicina convencional a espécie é usada principalmente para o tratamento de vários tipos de cânceres, mas também para hepatite crônica, artrite reumatóide e infecções do trato respiratório, urinário e digestivo, o que foi confirmado por numerosos estudos . Além disso, foram relatados fortes efeitos antivirais de alguns polissacaropéptidos isolados de T. versicolor e significativa atividade antioxidante de extratos de Trametes spp. de corpo frutífero. Estes efeitos baseiam-se principalmente na produção do polissacarídeo Krestin (PSK) e de vários complexos polissacarídeos, compostos que reduzem as metástases cancerígenas e estimulam a produção de interleucina-1 em células humanas .

A presença abundante de radicais livres no ambiente está associada ao aparecimento de stress oxidativo que é a base do envelhecimento e do início e progresso de várias doenças e distúrbios dos quais uma grande parte da população mundial sofre e morre . O DNA é mais sensível aos danos oxidativos do que outras macromoléculas. Os danos no ADN, como as quebras de fios, podem ser induzidos por vários agentes entre os quais o H2O2 produz um efeito genotóxico. Sabe-se que estes danos podem afectar a resposta imunitária não só em doenças inflamatórias mas também em cancros . O teste do cometa é um teste bem estabelecido e eficaz de alta sensibilidade que tem sido usado para examinar os danos do DNA e pode ser aplicado para avaliar o potencial genotóxico e protetor de vários produtos naturais .

Uma atividade genoprotetora de extratos de cogumelos baseada na redução dos danos oxidativos do DNA também pode desempenhar um papel significativo na prevenção e tratamento de várias doenças e distúrbios mencionados, mas muito poucos estudos até hoje o consideraram como uma possível ferramenta de ação em diferentes terapias . Portanto, o objetivo do estudo foi avaliar os efeitos antigenotóxicos de extratos de micélio e basidiocarpo de espécies selecionadas de Trametes sobre os glóbulos brancos periféricos humanos e avaliar a dependência de seu potencial antioxidante.

2. Materiais e Métodos

2,1. Organismos e Condições de Cultivo

Culturas de Trametes versicolor BEOFB 321, T. hirsuta BEOFB 301, e T. gibbosa BEOFB 310 foram isolados de corpos frutíferos coletados da Sérvia e mantidos em meio ágar de malte na coleção de cultura do Instituto de Botânica, Faculdade de Biologia, Universidade de Belgrado (BEOFB).

O inóculo foi preparado por inoculação de 100,0 mL de meio sintético (glicose, 10.0 g L-1; NH4NO3, 2,0 g L-1; K2HPO4, 1,0 g L-1; , 0,4 g L-1; , 0,5 g L-1; extracto de levedura, 2,0 g L-1; pH 6,5) com 25 discos miceliais (Ø 0.5 cm, a partir de uma cultura de 7 dias de ágar malte) em frascos de 250 mL e incubação num agitador rotativo a 100 rpm, à temperatura ambiente (°C) durante 7 d. A biomassa resultante foi lavada e homogeneizada com 100,0 mL de água destilada estéril (dH2O) num misturador de laboratório. A biomassa homogeneizada (30,0 mL) foi utilizada para inoculação de 500,0 mL de meio sintético modificado (com glicose presente a 65,0 g L-1). O cultivo submerso foi realizado em frascos de 1000 mL à temperatura ambiente em agitador rotativo durante 21 d. A biomassa obtida foi filtrada, lavada 3 vezes com dH2O em agitador magnético, e seca a 50°C até peso constante.

2.2. Preparação dos Extratos Fúngicos

O corpo de frutificação seco e micélio (3,0 g) foram extraídos por agitação com 90,0 mL de etanol a 96% a 30°C durante 72 h. Os extratos resultantes foram centrifugados (20°C, 3000 rpm, 15 min) e os sobrenadantes foram filtrados através do papel de filtro Whatman número 4, concentrados sob pressão reduzida em um evaporador rotativo (BÜCHI R-114, Suíça) a 40°C para secar, e redissolvidos em etanol a 96% para ensaio antioxidante ou água para ensaio antigenotóxico a uma concentração inicial de 20,0 mg mL-1. O rendimento da extracção foi expresso em percentagem em relação ao peso seco.

2,3. Actividade Genoprotectora

2.3.1. Sujeitos

Amostras de sangue total separado foram obtidas por punção venosa de três doadores saudáveis com idade inferior a 25 anos. Os participantes do estudo eram não fumantes e não alcoólicos, não recebendo nenhuma terapia ou medicação e não tomando suplementos dietéticos.

2.3.2. O desenho do estudo

Genotoxicidade de todos os extratos e concentrações (20,0, 10,0, 5,0, 2,5, 1,25, 0,625, e 0,312 mg mL-1) foi estudado pelo tratamento dos glóbulos brancos periféricos humanos a 37°C durante 30 min com o objetivo de avaliar os danos ao DNA. Normalmente, os glóbulos brancos são usados, pois são obtidos de forma relativamente não invasiva, não requerem desagregação tecidual e comportam-se bem no ensaio do cometa. O tratamento com tampão fosfato salino (PBS) a 37°C durante 30 min foi usado como controle positivo e o tratamento com 25,0 μM H2O2 no gelo durante 15 min como controle negativo.

Dois protocolos independentes foram usados para avaliar o potencial antigenotóxico dos extratos, usando pré-tratamento e pós-tratamento com os extratos. No pré-tratamento, as células foram incubadas com extratos a 37°C por 30 min, depois lavadas com PBS, e expostas a H2O2 por 15 min. No pós-tratamento, as células foram tratadas com H2O2 em gelo durante 15 min, lavadas com PBS, e posteriormente tratadas com as sete concentrações de extrato a 37°C durante 30 min. Após cada tratamento, as células foram lavadas com PBS. A incubação com PBS a 37°C por 30 min foi o controle negativo e o tratamento com 25,0 μM H2O2 no gelo por 15 min representou o controle positivo.

Foram realizadas três réplicas para cada experimento e 100 núcleos foram analisados para cada.

2,3,3. O ensaio de electroforese em gel de célula única

O ensaio do cometa foi realizado como descrito por Singh et al. . O teste do cometa alcalino é capaz de detectar quebras de fios de DNA e locais alcalinos, e a extensão da migração do DNA indica o grau de dano de DNA nas células.

Amostras de sangue total (6.0 μL) foram suspensas em 0.67% de agarose de baixo ponto de fusão (LMP) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) e pipetadas em lâminas de microscópio de vidro superfrostado, pré-revestidas com uma camada de 1% de agarose de ponto de fusão normal (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), espalhadas usando um deslizamento de cobertura, e mantidas em gelo por 5 min para solidificar. Depois de suavemente removidas as lâminas de cobertura, as suspensões celulares nas lâminas foram tratadas com os extratos e H2O2, como descrito acima. Após os tratamentos, todas as lâminas foram cobertas com a terceira camada de agarose 0,5% LMP e novamente foi permitido solidificar sobre o gelo por 5 min. Após a remoção das lâminas de cobertura, as lâminas foram colocadas em solução de lisagem fria (2,5 M NaCl, 100 mM EDTA, 10 mM Tris, 1% Triton X100, e 10% dimetil sulfóxido, pH 10,0 ajustado com NaOH) a 4°C durante a noite e depois submetidas a eletroforese e coloração com brometo de etídeo. Os cometas foram observados e analisados utilizando um microscópio Olympus ×50 (Olympus Optical Co., Gmbh Hamburg, Alemanha), equipado com um dispositivo para registro de fluorescência com ampliação de 100x. A avaliação dos danos no DNA foi realizada conforme descrito por Anderson et al. . Nomeadamente, as células foram graduadas por olho em cinco categorias correspondentes às seguintes quantidades de ADN na cauda: (A) nenhum dano, <5%; (B) dano de nível baixo, 5-20%; (C) dano de nível médio, 20-40%; (D) dano de nível alto, 40-95%; (E) dano total, >95% (Figura 1). A análise foi realizada em 100 células selecionadas aleatoriamente por sujeito (50 células de cada uma de 2 lâminas replicadas). Para obter análise semiquantitativa dos dados, a lesão no DNA foi caracterizada como migração de DNA acima de 5% (classes de cometa B + C + D + E).

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2.4. Actividade Antioxidante

2.4.1. DPPH- Ensaio

Atividade antioxidante foi definida medindo o branqueamento da solução de metanol de cor púrpura de 1,1-difenil-2-picril-hidrazil radical () estável. Os efeitos necrófagos foram medidos espectrofotometricamente (CECIL CE 2501) a 517 nm e calculados usando a equação:onde é absorvância do controle negativo (mistura de reação sem extrato) e é absorvância da mistura de reação.

Concentração do extrato (mg extrato/mL) fornecendo 50% de redução (EC50) foi obtida por interpolação a partir da análise de regressão linear. Todas as medições foram realizadas em triplicata para análise estatística. Como controle positivo foi utilizado o antioxidante comercial, butil-hidroxianisolo (BHA), na faixa de concentração de 20,0 mg mL-1-0,02 mg mL-1.

2,4.2. Determinação do Teor Total de Fenol

Os compostos fenólicos totais nos extratos miceliais foram estimados com o reagente Folin-Ciocalteu de acordo com o método de Singleton e Rossi , utilizando ácido gálico como padrão. A concentração foi determinada como μg de equivalentes de ácido gálico (GAE) por mg de extrato seco, usando uma equação que foi obtida a partir de um gráfico padrão de ácido gálico como

2.4.3. Determinação do conteúdo total de flavonóides

O conteúdo total de flavonóides foi determinado pelos métodos de Park et al. usando quercetina como padrão. A quantidade foi expressa como μg de equivalentes de quercetina (QE) por mg de extrato seco, usando uma equação obtida de um gráfico padrão de quercetina hidratada como

2,5. Análise estatística

Os resultados foram expressos como a média ± erro padrão dos dados obtidos a partir de três medições paralelas. A análise de variância unidirecional (ANOVA) foi realizada utilizando o software STATISTIKA, versão 5.0 (StatSoft Inc.) para testar quaisquer diferenças significativas. valores inferiores a 0,01 foram considerados estatisticamente significativos. A análise estatística dos dados do ensaio do cometa foi realizada pelo teste χ2 usando o software Statgraph 4.2. Para realizar o teste χ2, os resultados das três experiências foram agrupados e avaliamos o número total de células com danos no DNA. Uma diferença em foi considerada estatisticamente significativa.

3. Resultados e Discussão

3.1. Rendimento de extração

Rendimento de extração de biomassa de micélio para as três espécies foram significativamente maiores em comparação com o corpo frutífero (). T. gibbosa teve o maior rendimento de extração da biomassa de micélio seco (34,6%) e o menor rendimento dos corpos de frutificação secos (2,2%). O maior rendimento de extracção de corpos de frutificação de 6.67% foi encontrado em T. versicolor, cujo rendimento de extracção de micélio foi de 8.0%. Os rendimentos em T. hirsuta foram de 12.0% (para o micélio) e 2.85% (para o corpo de frutificação). As diferenças na eficiência de extração entre as espécies, tanto para o micélio quanto para o corpo frutífero, foram estatisticamente significativas ().

Relatos anteriores mostraram a dependência da extratibilidade da biomassa em espécies, cepas e solventes. Assim, Ren et al. descobriram que os rendimentos de extração de T. gibbosa basidiocarp foram de 1,22% para extrato de éter de petróleo, 6,44% para acetato de etila e 9,2% para extratos de metanol. O metanol também foi um bom solvente para o T. versicolor basidiocarp, cujo rendimento variou entre 4,1% e 9,16%. Com base em nossos resultados, pode-se concluir que os álcoois são os melhores solventes, mas o etanol é mais fraco que o metanol.

3,2. Atividade Genoprotetora

Como todos os doadores de sangue eram de boa saúde e de idade semelhante e não tinham medicamentos, a análise estatística não mostrou diferenças claras em suas respostas aos extratos. Portanto, os resultados dos três experimentos foram agrupados. O tratamento dos leucócitos de sangue periférico com H2O2 causou uma rápida e poderosa indução de quebras de um só fio no DNA nuclear, que foi visível no ensaio do cometa como migração de DNA.

Nossos resultados demonstraram que os extratos de corpo de frutificação de T. versicolor de 0,312 a 20.0 mg mL-1 não causou aumento significativo no número total de células danificadas por ADN em comparação com o controlo positivo, o que mostra claramente que o extracto testado não era um agente genotóxico (Figura 2(a) (A)). A distribuição (valor) dos danos totais de ADN também foi a mesma do controlo positivo. Por outro lado, estes extractos mostraram efeitos protectores contra H2O2 tanto no pré- como no pós-tratamento dos leucócitos (Figura 2(a) (B, C)). O extrato a 5,0 mg mL-1 teve o maior efeito e a 20,0 mg mL-1 o menor efeito em ambos os tratamentos. O valor do dano total de DNA diminuiu estatisticamente em comparação com o controle positivo em todas as concentrações ().

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T. extrato de corpo de frutificação hirsuta em todas as concentrações exceto 20,0 mg mL-1 não mostrou atividade genotóxica já que o nível de dano total de DNA não foi estatisticamente maior que o do controle positivo (Figura 2(b) (A)). Entretanto, a uma concentração de 20,0 mg mL-1, o efeito genotóxico e o dano total de DNA nas células foram estatisticamente diferentes em comparação com o controle positivo. Em pré-tratamentos e pós-tratamentos de leucócitos, o extrato em todas as concentrações, exceto a mais alta, exibiu um efeito protetor contra danos de DNA induzidos por H2O2, mostrando uma diminuição significativa do dano total de DNA comparado com o controle positivo (Figura 2(b) (B, C)). Estes tratamentos mostraram uma correlação dose-dependente, com o maior efeito protetor a uma concentração de extrato de 0,312 mg mL-1 enquanto que a concentração de 20 mg mL-1 não mostrou proteção contra cometas induzidos por H2O2.

A ausência de um efeito genotóxico, bem como um efeito antigenotóxico significativo, ou seja, a redução do dano de DNA induzido por H2O2, tanto no pré- como no pós-tratamento, também foi observada para o extrato de corpo frutífero de T. gibbosa nas sete concentrações (Figura 2(c)). Entretanto, ao contrário dos extratos de T. hirsuta, uma resposta dose-dependente não foi observada nos extratos de T. gibbosa basidiocarp; isto é, uma diminuição gradual da concentração do extrato não correspondeu a uma redução proporcional da genotoxicidade induzida por H2O2.

Os extratos de micélio de T. versicolor, T. hirsuta, e T. gibbosa, em todas as concentrações analisadas, não tiveram atividade genotóxica (Figuras 3(a) (A), 3(b) (A), e 3(c) (A)). Todos os extratos e concentrações de micélio mostraram um efeito antigenotóxico significativo contra o dano ao DNA induzido pelo H2O2, tanto no pré-tratamento quanto no pós-tratamento, e essas atividades não foram marcadamente diferentes. Em T. versicolor, uma atividade ligeiramente menor foi observada na menor concentração de extrato. Em T. hirsuta, concentrações de 5,0, 2,5 e 20,0 mg mL-1 foram mais efetivas, enquanto em T. gibbosa o maior efeito protetor foi observado em uma concentração de 2,5 mg mL-1 e o menor em 20,0 mg mL-1 (Figuras 3(a) (B, C), 3(b) (B, C), e 3(c) (B, C)).

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Números compostos mutagênicos e carcinogênicos estão presentes em diferentes fontes naturais . Por outro lado, alguns compostos naturais podem ser prooxidantes, causando efeitos genotóxicos e/ou citotóxicos ou antioxidantes, dependendo da concentração e duração da exposição . As espécies de cogumelos altamente nutritivas e medicinais podem ter diferentes efeitos in vitro e in vivo devido à sua instabilidade em condições de digestão ou incapacidade de absorção pelo tracto gastrointestinal . Nomeadamente, as actividades obtidas in vitro não correspondem necessariamente àquelas encontradas in vivo. É também importante salientar que os efeitos genotóxicos e antigenotóxicos dos extractos de cogumelos dependem das espécies, da concentração e do ensaio utilizado para a sua avaliação. Assim, nossos resultados demonstraram diferentes capacidades das três espécies de Trametes para diminuir os danos de DNA induzidos por H2O2; por exemplo, a menor atividade foi observada no extrato de corpo frutífero de T. hirsuta. Uma clara relação dose-resposta inversa entre o nível de dano de DNA e a concentração de extrato foi observada apenas no extrato de T. hirsuta basidiocarp. Entretanto, em T. versicolor e T. gibbosa, o aumento da concentração de extrato acima da dose ótima não levou a nenhuma melhora nos resultados do cometa, o que confirma os resultados de Miyaji et al. . Estes autores mostraram a ausência de relação dose-resposta entre as concentrações de extrato de Lentinus edodes e seu efeito antigenotóxico. É importante mencionar que a combinação fenólica, flavonóide e outros ingredientes nos extratos deve ter maior potencial que os componentes individuais dos extratos, indicando a importância das coações de todos os ingredientes . Essa descoberta poderia resultar em diferentes tendências de atividade antigenotóxica de Trametes spp. A dependência da atividade genotóxica do extrato no tipo de ensaio foi demonstrada por Morales et al. ; ou seja, eles relataram ausência de efeito mutagênico de extratos basidiocarpos de Lactarius deliciosus, Boletus luteus, Agaricus bisporus e Pleurotus ostreatus em células de mamíferos usando o teste Ames Salmonella/microssome. Contudo, uma fraca actividade do extracto de P. ostreatus foi obtida usando o ensaio CHO/HPRT.

Os mecanismos subjacentes ao efeito antigenotóxico dos extractos de cogumelos ainda não são completamente conhecidos. Os efeitos protetores dos extratos parecem ser baseados em mais de um mecanismo de ação, o que não é incomum para os cogumelos de acordo com Gebhart . Os mecanismos antigenotóxicos poderiam ser avaliados por aplicações de pré-tratamentos e pós-tratamentos, ou seja, combinações diversas de extratos e H2O2. Nossos resultados positivos em ambos tratamentos indicam que os extratos têm efeitos protetores tanto a nível de prevenção como de intervenção e podem atuar como desmutagênios e bioantimutagênios, também demonstrado por estudos anteriores . A eficiência do pré-tratamento, notada no presente estudo, poderia ser explicada pelo aumento da capacidade antioxidante das células, ou seja, estimulando a síntese e atividade das enzimas antioxidantes durante a indução do estresse oxidativo . O efeito positivo do pós-tratamento poderia ser o resultado da ação sinérgica das atividades intervencionistas através do catarro dos radicais livres e da estimulação das enzimas antioxidantes, assim como da excitação da reparação do DNA, como sugerido por Chiaramonte et al. Como esses autores relataram danos significativos ao DNA após 30-60 min de exposição a um agente oxidante, pode-se concluir que a reparação do DNA teve um papel menos significativo na proteção contra H2O2 desde condições pós-tratamento consideradas até 30 min de incubação. Portanto, a atividade genoprotetora dos extratos de Trametes spp. é provavelmente baseada em ações antioxidantes. Por outro lado, sabe-se que os organismos eucarióticos desenvolveram uma via de sinalização, chamada resposta ao dano do DNA, para proteger contra insultos genómicos. Gasser e Raulet demonstraram que a resposta de dano de DNA alerta o sistema imunológico induzindo a expressão dos ligandos de superfície celular para o receptor imunológico ativador NKG2D, que é expresso pelas células assassinas naturais (células NK) e algumas células T. Portanto, a atividade genoprotetora de Trametes spp. nas células expostas a agentes genotóxicos poderia modular a resposta de dano de DNA e funcionar como uma barreira na tumorigenese precoce. As pesquisas posteriores devem incluir a análise dos níveis de superóxido dismutase e catalase em linfócitos tratados com extratos de Trametes spp., tanto no pré como no pós-tratamento com H2O2, a fim de confirmar a suposição de que o aumento da capacidade antioxidante nas células é induzido por esses extratos.

3,3. Atividade Antioxidante

Os extratos de etanol testados eram bons antioxidantes, mas sua atividade dependia das espécies. Os extractos de corpo frutífero mostraram efeitos necrófagos significativamente maiores do que os extractos de micélio (). A maior atividade de limpeza radical DPPH foi detectada em extratos T. versicolor, tanto no corpo frutífero quanto no micélio (63,5% e 59,4%, resp.), o que foi confirmado pelos valores de EC50 (15,22 mg mL-1 e 16,18 mg mL-1, resp.). Um nível ligeiramente menor de atividade foi encontrado para extratos de T. hirsuta (59,0% para basidiocarps e 46,8% para micélio), cujas concentrações de 17,06 mg mL-1 e 21,81 mg mL-1, respectivamente, proporcionaram uma redução de 50% de radicais. A T. gibbosa foi a espécie com menor potencial de necrose, especialmente de extratos de micélio (39,7%) com EC50 no valor de 26,15 mg mL-1. No entanto, a capacidade de absorção de radicais do extrato do corpo frutífero não foi significativamente menor em comparação com as outras duas espécies (53,7% e EC50 de 18,13 mg mL-1). A atividade de scavenging do antioxidante sintético BHA foi de 94.28%, e uma concentração de 0.10 mg mL-1 proporcionou redução de 50%.

Conteúdos totais de fenol no corpo frutífero e extratos de micélio das espécies Trametes foram significativamente diferentes () (Tabela 1). Geralmente, os teores de fenol em extratos de corpo frutífero foram maiores do que em extratos de micélio.

Both T. versicolor basidiocarp e T. versicolor mycelium extractos foram os mais ricos em fenóis e flavonóides, enquanto as concentrações mais baixas foram medidas em extractos de T. gibbosa. De acordo com as concentrações de fenol e flavonóides, extratos de T. hirsuta vieram entre os extratos das outras duas espécies (Tabela 1). O grau de correlação entre a atividade de desidratação dos extratos e o conteúdo de fenol e flavonóides foi alto com para corpos frutíferos de 0,98 e 0,99, respectivamente, e para micélio de 0,97 e 0,99, respectivamente.

Estudos anteriores também indicaram o potencial antioxidante das espécies de Trametes. Assim, Kamiyama et al. demonstraram que uma concentração de até 0,5 mg mL-1 de extrato de T. gibbosa basidiocarps em uma concentração de 1,0 mg mL-1, foi reduzida em até 91,5% por um extrato de metanol a uma concentração de 1,0 mg mL-1. Os extratos de etanol testados em nosso estudo tiveram capacidades ligeiramente menores, mas maiores do que os extratos do corpo frutífero de T. hirsuta analisados por Sheikh et al. .

De acordo com Mau et al. e Palacios et al. , os compostos fenólicos desempenham um papel fundamental na atividade antioxidante. Estes compostos são constituintes muito abundantes e importantes dos corpos de frutificação dos cogumelos e micélios. Sua capacidade é baseada na presença de grupos hidroxila agindo como agentes redutores, quelantes metálicos, supressores de oxigênio singlet, e doadores de hidrogênio . No entanto, em alguns casos sua atividade não pôde ser atribuída ao conteúdo total de fenol em extratos, o que é confirmado pela comparação de nossos resultados com os de Johnsy e Kaviyarasana . Nomeadamente, 91,5% foi reduzido pelo extrato de T. gibbosa basidiocarp contendo 23,8 μg GAE mg-1 extrato, enquanto um extrato da linhagem BEOFB 310 com uma concentração de fenol de 20,07 μg GAE mg-1 extrato foi extraído com apenas 63,5% de radicais. Entretanto, a concentração de flavonoides na cepa sérvia T. gibbosa foi significativamente maior em comparação com a cepa testada por Johnsy e Kaviyarasana (7.63 μg QE mg-1 de extrato e 0.59 μg QE mg-1 de extrato, resp.), e isto poderia ser explicado pelas várias polaridades dos solventes, bem como pela diferente capacidade de síntese de flavonoides.

4. Conclusão

O estudo foi a primeira tentativa de avaliar a atividade protetora do DNA dos extratos de T. versicolor, T. hirsuta, e T. gibbosa e determina se isto foi baseado em seu potencial antioxidante. Os resultados sugerem que extratos destas três espécies poderiam ser considerados como fortes agentes antigenotóxicos capazes de estimular a resposta genoprotetora das células, contribuindo para o aumento da função imunológica, remoção de toxinas e fortalecimento, o que se refere ao uso tradicional. Entretanto, investigações adicionais são necessárias para revelar portadores específicos da atividade antigenotóxica e o modo de proteção do DNA contra danos oxidativos.

Conflito de Interesses

Os autores declaram não ter conflito de interesses em relação à publicação deste trabalho.

Acreditos

Os autores agradecem ao Professor Dr. Steve Quarrie, Professor Visitante da Universidade de Newcastle, Reino Unido, por revisar e melhorar o inglês. Este estudo foi realizado com o apoio financeiro do Ministério da Educação, Ciência e Desenvolvimento Tecnológico da República da Sérvia, Projeto nº 173032 e Projeto nº 173034.