Testes de coagulação são realizados para demonstrar a presença de anticoagulante lúpico capaz de prolongar o tempo de testes de coagulação baseados em fosfolípidos.
A presença de anticoagulante lúpico é altamente específica para o APS e há uma forte associação entre este último e eventos trombóticos ou perda fetal.
No entanto, o número de falsos positivos e falsos negativos é bastante elevado.
Muitos fatores podem afetar a falta de sensibilidade e especificidade destes testes, incluindo variáveis pré-analíticas, analíticas e pós-analíticas.

Critérios de diagnóstico de lúpus anticoagulante circulante

Quatro desses critérios existem e estão resumidos abaixo.

Tabela II: Critérios para diagnóstico laboratorial de lúpus anticoagulante

1. Prolongamento do tempo de coagulação dependente do fosfolipídeo

2. Demonstração de inibição em um teste de plasma misto/normal

3. Demonstração de que o tempo de coagulação prolongado é dependente do fosfolipídeo: encurtamento ou correção do tempo de coagulação inicialmente prolongado pela adição de fosfolipídeo em excesso (teste de confirmação)

4. Exclusão de inibidores específicos direcionados contra fatores de coagulação (e.g. anticorpos anti-factor VIII)

Variáveis pré-analíticas no rastreio para anticoagulante lúpus em circulação

A fase pré-analítica é crucial para o diagnóstico de APS.
A presença de plaquetas residuais no plasma pode afectar testes de coagulação que dependem de fosfolípidos derivados de plaquetas; tais fosfolípidos podem neutralizar anticorpos antifosfolípidos presentes na amostra e produzir falsos negativos. É portanto recomendado que seja feita uma centrifugação dupla compreendendo a centrifugação inicial a 2 000g durante 15 minutos à temperatura ambiente, seguida de uma segunda centrifugação a mais de 2 500g durante 10 minutos de modo a obter plasma contendo menos de 10 000 plaquetas/µL.

Escolha de testes

Muitos testes dependentes de fosfolípidos foram propostos.
Por causa da sensibilidade variável entre testes, bem como da falta de padronização em certos testes, a Sociedade Internacional de Trombose e Hemostasia (ISTH) emitiu diretrizes sobre a escolha dos testes a serem usados.
Dois sistemas de teste separados usando princípios diferentes devem ser usados.
Tempo de veneno de víbora de Russell diluído (DRVVVT) deve ser usado em todos os casos. Este teste é considerado específico e robusto para a detecção de anticoagulantes lupus.
O segundo teste a ser realizado é o APTT usando sílica como ativador por causa de sua sensibilidade. O uso de caulim ou ácido elágico como ativador não é recomendado, nem o uso de tempo de tromboplastina diluída, de testes baseados em tempos de ecarina ou textarina, ou de tempo de coagulação de caulim.

Estudo de mistura

O plasma pool usado deve ser preparado de acordo com os métodos usuais. A centrifugação dupla é necessária para obter plasma contendo menos de 10 000 plaquetas/µL e tendo uma actividade próxima dos 100% para todos os factores. O plasma comercial pool, liofilizado ou congelado, pode ser utilizado desde que satisfaça as condições exigidas e tenha sido validado para este fim.
O teste de mistura deve envolver uma proporção de 1:1 entre o plasma teste e o plasma normal pool sem pré-incubação.
O teste de tempo de trombina antes do estudo de mistura pode demonstrar a presença na amostra de heparina ou outros inibidores. Entretanto, certos reagentes, em particular os usados nos testes DRVVT, contêm um inibidor de heparina, permitindo que o teste seja realizado em amostras contendo até 0,8 IU de anti-Xa/mL.

Testes de confirmação

Testes envolvem avaliação da correção do tempo de coagulação da amostra de plasma na presença de excesso de fosfolipídeo. Devem ser usados fosfolipídios bilayer ou fosfolipídios hexagonais. Por outro lado, o uso de plaquetas congeladas-degelo não é recomendado devido à variação entre lotes.

Exclusão de inibidores específicos direcionados contra fatores de coagulação

Proteção de um inibidor específico direcionado contra um dado fator de coagulação (principalmente fator VIII ou fator IX) é essencial, uma vez que a presença de tais inibidores pode expor os pacientes a risco hemorrágico alto e potencialmente ameaçador de vida, requerendo gerenciamento imediato por equipes especializadas. Este teste envolve o ensaio do fator em questão e, quando necessário, a triagem específica e o ensaio do inibidor.