As catequinas têm muitos benefícios, incluindo a prevenção ou redução dos danos cutâneos. As catequinas são ingredientes importantes das folhas de chá e têm uma intensa actividade antioxidante e fisiológica representativa. São membros do grupo de compostos de polifenóis encontrados em muitas plantas medicinais. As principais fontes de catequinas são Camellia sinensis (C. sinensis) e C. assumica. O chá verde contém 75-80% de água e compostos de polifenóis (flavanóis, flavandióis, flavonóides e ácido fenólico) (Zillich et al. 2015), e as catequinas são responsáveis por mais de 75% dos compostos de polifenóis nas folhas de chá. São taninos do tipo condensação com anel e a estrutura básica do flavano-3-ol. Eles têm muitas características estruturais químicas, tais como grupos hidroxila (-OH), que se combinam facilmente com outros materiais (Singh et al. 2011). Existem oito catequinas (Fig. 1): C ((-)-catequina), EC ((-)-epicatequina), ECG ((-)-epicatecalato), EGC ((-)-epigalocatequina), EGCG ((-)-epigalocatequina galato), GC ((-)-gallocatequina), CG ((-)-catecalato), e GCG ((-)-gallocatecalato). Os principais tipos são CE, ECG, EGC, e EGCG (Jin et al. 2006), que estão presentes de forma proeminente no chá verde (Fung et al. 2012). As catequinas oferecem várias vantagens para a saúde, pois eliminam os radicais livres e retardam a degradação da matriz extracelular induzida pela radiação ultravioleta (UV) e pela poluição (Shi et al. 2016). As catequinas também afetam diretamente a pele ao ativar a síntese de colágeno e inibir a produção de enzimas de metaloproteinase de matriz (Arct et al. 2003). Devido ao hidroxil no grupo galato, EGCG e ECG são necrófagos de radicais livres altamente eficazes em comparação com muitos outros antioxidantes padrão, como ácido ascórbico, tocoferol e trolox (Gulati et al. 2009; Matsubara et al. 2013; Kim et al. 2018). Devido a estas ações úteis, catequinas de chá são cada vez mais utilizadas em produtos médicos, farmacêuticos e cosméticos e estão sendo ativamente estudadas em uma variedade de abordagens.

Fig. 1
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Fórmula estrutural de oito catequinas. As catequinas têm muitas características estruturais químicas, como os grupos hidroxila (-OH), que se combinam facilmente com outros materiais. Existem oito catequinas: C ((-)-catequina), EC ((-)-epicatequina), ECG ((-)-epicatecalato), EGC ((-)-epigalocatequina), EGCG ((-)-epigalocatequina galato), GC ((-)-gallocatequina), CG ((-)-catecalato), e GCG ((-)-gallocatecalato). Os principais tipos são C, EC, ECG, EGC, e EGCG

Atividade antioxidante

As catatecas são substâncias bem estudadas com efeitos antioxidantes comprovados. Foram realizados estudos para aumentar a estabilidade das catequinas e aumentar a sua taxa de absorção no corpo humano. Estudos recentes têm-se concentrado em maximizar a eficácia dos anti-oxidantes. O ácido gálico e as catequinas mostram uma actividade anti-oxidante estável por síntese de galactano, e os anti-oxidantes da catequina ligam-se covalentemente a cadeias de proteínas (Spizzirri et al. 2009). A Caesalpinia decapetala (C. decapetala) é eficaz na estabilidade de oxidação de uma emulsão óleo na água (Gallego et al. 2017). A análise usando LC-ESI/LTQ Orbitrap/MS do germoplasma autóctone da região da Campânia mostrou um nível maior de atividade antioxidante em comparação com o germoplasma não autóctone (D’Urso et al. 2018). A glucosilação enzimática do ácido cafeico e EGCG leva a uma melhor capacidade anti-oxidante num modelo celular de envelhecimento cutâneo induzido por UV (Nadim et al. 2014). A árvore flamboyant (Delonix regia) tem atividades antioxidantes e antimicrobianas potentes (Feng et al. 2014). A capacidade anti-oxidante do EGCG é eficaz contra lesões por fibroblastos dérmicos humanos induzidas por H2O2 (Feng et al. 2013). Os derivados lipofilizados de EGCG mostram um aumento da atividade antioxidante (Zhong e Shahidi 2011). Flavonóides e triterpenóides do fruto de Alphitonia neocaledonica têm atividade citotóxica, anti-oxidante e anti-tirosinase e são ingredientes cosméticos úteis (Muhammad et al. 2014). Aproximadamente 106 compostos fenólicos foram encontrados usando ensaios de cromatografia líquida acoplados com ionização por eletroospray para um perfil rápido de compostos fenólicos de folhas de bordo vermelho (Acer rubrum) (Li e Seeram 2018). Os extractos de caule de bambu têm demonstrado actividades anti-melanogénicas e anti-oxidantes num sistema sem células e células de melanoma B16F10 (Choi et al. 2018). O extrato de etanol da árvore de marula é muito eficaz para impulsionar as atividades in vitro. O ECG e o EGCG no extracto de marula contribuem para as actividades anti-envelhecimento (Shoko et al. 2018). A casca da Cocos nucifera mostrou atividades antioxidantes e antidepressivas através de alterações oxidativas no córtex pré-frontal (Lima et al. 2016).

Atividade de proteção UV

Estudos exaustivos da capacidade de proteção das catequinas contra a radiação UV demonstraram que as catequinas são capazes de melhorar a fotoestabilidade e a proteção da pele contra os raios UV. Também foram realizados estudos para encontrar utilizações eficazes das catequinas em vários campos, como a prevenção do envelhecimento cutâneo, através do aumento da sua eficácia e estabilidade. As catequinas melhoram a estabilidade das suspensões nanoethosomais EGCG para aumentar a eficácia da inibição dos danos cutâneos induzidos pelos raios UVB (Zhang et al. 2016). A emulsificação das catequinas aumenta a permeação da pele, a capacidade protectora contra os raios UV e os efeitos anti-idade (Yoshino et al. 2013). Várias análises, incluindo os ensaios de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT) e western blot, mostram que o ECG é uma poderosa cura para os danos induzidos por UVB aos queratinócitos HaCaT (Huang et al. 2007). A exposição à radiação solar simulada com sorbentes de proteção solar mostrou que os extratos de semente de uva têm proteção de amplo espectro devido à sua alta fotoestabilidade e um deslocamento vermelho sobre todo o índice de raios UVA e UVB (Martincigh e Ollengo 2016). Os flavonóides mostram alta estabilidade de luz e calor na preservação e liberação de ácido metacrílico (N-vinil-pirrolidona) ácido (N-vinil-pirrolidona) (Parisi et al. 2012). A atividade inibitória contra a tirosinase de cogumelos de componentes isolados do aciculato de Neolitsea demonstra que esta planta poderia ser uma fonte de agentes produtores de anti-melanina (Kim et al. 2012). Queratinócitos humanos cultivados induzidos por UV foram tratados com EGCG, e os efeitos nas vias inflamatórias e translocação nuclear do fator de transcrição NF-κB foram avaliados. O EGCG inibiu as vias inflamatórias induzidas por UVB e UVA e a apoptose em queratinócitos humanos cultivados (Xia et al. 2005).

Atividade antimicrobiana

Pesquisa está em andamento para produzir cosméticos biológicos e funcionais usando as propriedades anti-microbianas naturais das catequinas. Experiências com células epiteliais humanas de células KB mostram que o flavan-3-ols e a proantocianidina de Limonium brasiliense (L. brasiliense) interagem com as gengipainas para inibir a adesão de Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) às células epiteliais hospedeiras (de Oliveira et al. 2017). Em estudos da atividade antimicrobiana do fullerene e seus derivados hidroxilados, C60 (OH)44 foi tão potente e amplamente eficaz quanto a catequina, que foi utilizada como controle para avaliação (Aoshima et al. 2009). Extractos de chá verde reduziram significativamente os níveis de Streptococcus mutans (S. mutans) na saliva e placas dentárias das crianças (Goyal et al. 2017).

Atividades antialergénicas e anti-inflamatórias

As alergias são causadas por uma reacção demasiado activa do sistema imunitário, produzindo prurido e inflamação. O contacto com certos alergénios leva a uma condição sensível. Foram realizados estudos sobre a actividade antialergénica das catequinas. Foram investigados os componentes anti-alérgicos da árvore do chá oolong e a actividade inibitória das catequinas na histamina libertada pelos mastócitos peritoneais dos ratos sensibilizados passivamente com o anticorpo anti-alérgico IgE da albumina. O GCG foi o componente antialergênico mais potente entre as catequinas do chá (Ohmori et al. 1995). Extratos de Acerola bagasse (A. bagasse) podem modular a atividade das proteases que atuam sobre atividades coagulantes, anti-coagulantes e trombolíticas, assim como a destruição de fosfolipídios, diminuindo assim a inflamação e a agregação plaquetária (Marques et al. 2018). Extratos de metanol da casca do caule de Vitellaria paradoxa (V. paradoxa) mostraram atividades anti-inflamatórias e antiartríticas na inflamação aguda e crônica em ratos albinos Wistar (Foyet et al. 2015). A clorexidina e os extractos de chá verde reduziram a corrosão e o desgaste da dentina. Alguns inibidores de metallo protease de matriz podem ser uma medida preventiva para prevenir a erosão-abrasão dentina (Magalhães et al. 2009).

Atividades antivirais e anticancerígenas

Muitos estudos têm sido realizados sobre a prevenção e tratamento de infecções virais (sarampo, AIDS, varicela, SARS, MERS, Ébola, etc.). Um estudo experimental demonstrou a actividade anti-influenza viral das catequinas do chá verde (Ide et al. 2014). Ent EC-(4alpha→8) EC (Ent-Epiafzelechin-(4alfa ->8) -epiafzelechin de Cassiajavanica não afetou a viabilidade e proliferação celular, mas interferiu com a penetração e adesão das células do vírus do herpes simplex (Cheng 2006). Em ensaios clínicos, o gargarejo com chá verde três vezes ao dia não alterou a taxa de contração do vírus da gripe. Os pesquisadores sugeriram que é necessário um estudo mais aprofundado das atividades anti-virais da catequina (Ide et al. 2014). Estudos têm encontrado substâncias anticancerígenas em plantas que inibem a proliferação de células cancerígenas, incluindo catequinas. Extratos ricos em polifenóis de Lawsonia inermis (L. inermis) L. (Henna) inibem os radicais oxidativos e a proliferação de células cancerígenas (Kumar et al. 2016).

Ativação da passagem da barreira cutânea

As catequinas têm excelente atividade antioxidante, mas seu alto peso molecular e sua ligação com a camada lipídica da pele são obstáculos para passar a barreira cutânea. Têm havido inúmeras tentativas para ultrapassar este problema. A entrega intradérmica mediada por microneedle permite que o EGCG penetre nas camadas mais profundas da pele. A microporação da pele com microneedles de maltose facilita a penetração do EGCG através do estrato córneo nas camadas mais profundas da pele, incluindo a epiderme e derme viáveis (Puri et al. 2016). Com base na utilização de emulsões oleo-água com diferentes teores de óleo, uma mistura de polifenóis contendo catequinas utilizando células de difusão do tipo Franz permeou a epiderme e derme da pele do porco in vitro (Zillich et al. 2013). Os aditivos hidrofílicos reduzem a actividade dos flavonóides, aumentando a sua solubilidade. A penetração cutânea dos flavonóides do extrato de folhas de uva, bem como da rutina, quercetina e catequinas ocorre através das membranas lipofílicas (Arct et al. 2002). Extratos de EGCG, quercetina, 14-EGCG e Ginkgo biloba mostram excelente penetração cutânea em pele branca fresca obtida de cirurgia abdominal em células estáticas de difusão do tipo Franz (dal Belo et al. 2009). As formulações Monoglycerol Ester (MGE)- cristal líquido (LC)- formando lipídio e monoolato de glicerol (GMO)-LC têm melhorado a penetração cutânea a partir de várias propriedades físico-químicas do medicamento. As formulações de MGE têm menor viscosidade, liberação mais rápida do medicamento e melhor permeabilidade da pele do que as formulações de GMO. A baixa viscosidade das preparações de MGE-LC pode afetar a difusão e permeabilidade do medicamento através da pele (Kadhum et al. 2017). Os lipossomas podem passar ativamente as camadas da pele através das membranas lipídicas artificiais de fósforo. Os fosfolípidos têm uma afinidade notável para certos grupos de flavonóides, e uma mistura de catequinas e fitosomas, um complexo de componentes naturalmente ativos e fosfolípidos (principalmente lecitina), aumenta a elasticidade da pele (Bombardelli 1991). A interacção entre o peptídeo de colagénio de peixe (FCP) e o EGCG foi analisada usando técnicas espectroscópicas, como os espectros de fluorescência copiam o dicroísmo circular e a espectroscopia infravermelha de Fourier-transformação (FTIR). Mais exposição da prolina foi encontrada quando os complexos FCP-EGCG se formaram. O FCP actua como um intensificador do EGCG e aumenta a absorção do EGCG pela pele e pelo corpo (Yang et al. 2015c). Micropartículas de quitosana contendo extratos de chá verde mostram permeação de catequinas em tecidos subcutâneos, e estudos de metabolismo mostram que as micropartículas de quitosana melhoram a entrega subcutânea de catequinas enquanto limitam sua degradação pelas enzimas da pele (Wisuitiprot et al. 2011).

Promoção da atividade celular

Os efeitos de extratos naturais, incluindo catequinas, sobre a atividade celular têm sido estudados extensivamente. Extractos de chá preto, verde e branco têm actividades anti-melanogénicas em melanócitos imortalizados. As folhas de chá fermentado têm a menor citotoxicidade e a maior actividade anti-melanogénica (Kim et al. 2015). O EGCG reduziu a secreção e produção de melanina em células de melanoma humano num estudo mecanicista que promove a hidratação da pele e mede as propriedades antioxidantes e pigmentantes. O EGCG aumenta a expressão gênica do ácido hialurônico sintase e a proliferação celular (Kim et al. 2018). EGCG-5′-O-α-glucopiranoside (EGCG-5′Glu), um derivado do EGCG, tem efeitos anti-oxidantes tanto no sistema celular livre de células como no sistema celular. O EGCG-5′Glu restaura a viabilidade celular das espécies reativas de oxigênio (ROS), regula caspases e moléculas de sobrevivência celular e aumenta a proliferação celular através da modulação da atividade da NF-κB (Han et al. 2018).

Utilização de lodo

Utilização de lodo de alto valor agregado em produtos farmacêuticos, cosméticos e alimentos tem feito progressos consideráveis. O tanino, um extrato de resíduos sólidos produzidos nos processos industriais da castanha, é um antioxidante natural eficaz para as indústrias cosmética, alimentícia e farmacêutica (Aires et al. 2016). As borras de café usadas são uma grande fonte de compostos bioativos de interesse para as indústrias cosmética e farmacêutica, e as metilantinas e os fenóis são compostos relacionados à saúde presentes nas borras de café usadas. O FTIR tem sido usado para avaliar ingredientes ativos úteis em borras de café usadas (Magalhães et al. 2016). A identificação e quantificação dos compostos fenólicos e as atividades de limpeza radical dos dois subprodutos da Vitis vinifera L. cv noir mostraram que eles têm alto potencial como antioxidantes (Reis et al. 2016). As procianidinas, compostas por oligómeros de catequina, funcionam na actividade anti-oxidante, quelação de metais, armadilhas radicais e ligação directa de enzimas. Com base nestes resultados, os oligómeros de procianidina ligam-se fortemente com os cabelos permanentes de queratina e inibem a destruição do cabelo causada por danos oxidativos (Kim 2011). Laccase catalisa a polimerização dos compostos fenólicos, sugerindo que a polimerização dos fenóis naturais por lacas pode ser aplicada ao desenvolvimento de novos pigmentos cosméticos (Jeon et al. 2010). Em testes de casca e sementes, os extratos de casca apresentam maior teor total de polifenóis e atividade antioxidante (Kosińska et al. 2012). Nas análises de caracterização e quantificação usando HPLC-ESI-MS/MS, os maiores níveis de atividade antioxidante nas partes comestíveis dos frutos araticum estavam na casca, seguidos pela polpa, e depois pelas sementes (Arruda et al. 2017). Em testes de cascas de cacau utilizando tratamento com água quente, foram produzidos extractos de fenol, açúcar e obromina ricos em anti-oxidantes quando tratados a 170 °C durante 30 min (Hernández-Hernández et al. 2018). A casca de Artocarpus heterophyllus (A. hererophyllus) é uma boa fonte de anti-oxidantes naturais e outras substâncias fisiologicamente activas, incluindo catequinas, de acordo com os resultados de várias análises, tais como LC-MS/MS e GC/MS (Sharma et al. 2013). As nozes sapucaia e seus subprodutos são ricos em compostos fenólicos de alta atividade antioxidante. O conteúdo de fenol é especialmente elevado na casca (Demoliner et al. 2018). Em outro estudo, as atividades antioxidantes das fibras da casca de quatro cultivares de coco foram examinadas, e os componentes fenólicos e as atividades antioxidantes da casca do coco foram confirmados (Oliveira et al. 2013).

Estabilidade

Catecas têm alta atividade antioxidante e protegem a pele dos raios UV do sol. Muitos estudos estão em curso para estabilizar as catequinas, que são altamente instáveis à luz solar. A adição de ácido α-lipóico às catequinas pode produzir um anti-oxidante eficaz estabilizando o EGCG (Scalia et al. 2013). Os componentes devem ser monitorados de perto ao avaliar a compatibilidade de catequinas e excipientes comumente usados para micro e nanoemulsões em ensaios complementares e térmicos. Especialmente para preparações contendo lipossomas, os processos de produção baseados no calor devem ser evitados (Ferreira-Nunes et al. 2018). Flavonóides, alcalóides e ácidos fenólicos em pastas de chá verde foram analisados para estabilidade em vários níveis de pH e foram mais estáveis em pH baixo (Jang et al. 2014). A fotoestabilidade do EGCG foi examinada sob as mesmas condições usando um filtro UVB solúvel em água, benzofenona-4(BP-4). Os resultados mostraram que a fotoestabilidade foi dependente da concentração; o nível máximo de foto-estabilização do EGCG (perda de catequina, 29,4 ± 2,2%) foi atingido na presença de 2,1% (p/p) de BP-4 (Bianchi et al. 2011). Um estudo de estabilização do colágeno à base de catecina mostrou que as interações hidrofóbicas e a interação de ligação ao hidrogênio afetaram a estabilização do colágeno por polifenóis vegetais (Madhan et al. 2005). Os extractos de C. decapetala têm propriedades anti-oxidantes devido aos compostos fenólicos presentes nas folhas. A uma concentração de 0,2%, os extractos de C. decapetala reduziram a degradação oxidativa da emulsão óleo na água (Gallego et al. 2017).

Modelo de cultura de biópsia de tecidos

Os resultados das aplicações in vivo de catequinas não são os mesmos que os resultados in vitro. Os modelos de bio-cultura tecidual desempenham um papel valioso ao substituir as experiências em animais nos estudos de catequinas. Para provar o princípio de que as proteínas e os principais marcadores genéticos podem ser alterados em um modelo otimizado de biópsia de tecidos inteiros, formulações tópicas contendo catequinas de chá verde foram examinadas em um modelo de cultura de biópsia de pele (Sidgwick et al. 2016). O EpiDerm tem propriedades anti-oxidantes como as dos organismos vivos e pode eliminar factores de stress oxidativo causado pelo EGCG sob condições experimentais in vitro (Yuki et al. 2013). Em uma experiência usando células HaCaT e RBL-2H3, a segurança e efeito anti-inflamatório de extratos lipídicos nanoencapsulados de folhas de chá verde solúveis usando o método de extração de CO2 supercrítico foram objetivamente comprovados (Shin et al. 2019).

Segurança para aplicação humana

Embora os extratos naturais sejam eficazes como antioxidantes e anti-microbianos, a segurança das catequinas deve ser garantida em aplicações humanas reais. Estudos sobre a segurança das catequinas têm sido realizados em experiências em animais e testes clínicos em humanos. A propionidina B-2 promove o crescimento do pêlo, e são necessários estudos de segurança para aplicação humana. A procianidina B-2 local foi segura e aceitável em uma série de testes de toxicidade. Os testes de mutagenicidade usando cobaias, bactérias e coelhos mostram que a procianidina B-2 não é um mutagénico (Takahashi et al. 1999). Em estudos de caracterização e biocompatibilidade de nanopartículas de prata “verde” usando polifenóis de chá verde, as nanopartículas de prata foram não tóxicas e biocompatíveis (Moulton et al. 2010).

Propriedades antioxidantes das catequinas usadas para outras aplicações

Além das suas actividades anti-oxidantes directas, as catequinas estão a ser estudadas para aumentar a sua utilidade em vários campos. Para aumentar a taxa do processo de tingimento do cabelo com produtos vegetais, as tintas poliméricas derivadas do fenol de Trametes versicolor utilizam uma reacção lacrimal com catechins e catechol para conseguir uma coloração permanente do cabelo com queratina de várias cores e tonalidades (Im e Jeon 2016). Materiais de embalagem de alimentos ou membranas ativas contendo antioxidantes, como EGCG e EC derivados de catequina, são uma nova forma de reduzir a oxidação de alimentos, cosméticos e produtos farmacêuticos usando materiais biopoliméricos. A atividade anti-oxidante do filme foi medida pela remoção de extratos de metanol contendo catequinas e EC, e suas quantidades foram de 32,90% e 36,68%, respectivamente (Iñiguez-Franco et al. 2012). O ácido tânico, EGCG e ECG foram ligados ao colágeno por uma extensa ligação de hidrogênio, aumentada por interações hidrofóbicas. Eles impediram o livre acesso da colagenase às áreas activas das cadeias de colagénio (Jackson et al. 2010).

Efeitos sinergéticos pelo método e processo de extracção

Muitas tentativas foram feitas para melhorar a eficácia e utilização das catequinas e para aplicar eficazmente as suas propriedades anti-oxidantes no corpo humano. As propriedades anti-oxidantes e barreira UV das moléculas podem ser usadas para formulações cosméticas e dermatológicas após um método de cromatografia líquida de alta performance (HPLC) seletiva ser desenvolvido e verificado para avaliar a eficácia ótima das catequinas no desenvolvimento de formulações tópicas (Ferreira-Nunes et al. 2017). A espectroscopia de infravermelho próximo (NIRS) foi proposta como uma forma rápida e não destrutiva de medir o conteúdo de três fenólicos principais (ácido cafeico, (+)-catequina e ácido clorogênico) (Magalhães et al. 2016). A modificação química da antocianina e das procianidinas para compostos mais lipofílicos por espectroscopia de massa tem a vantagem de aumentar a biodisponibilidade em matrizes biológicas porque a atividade anti-oxidante aumenta com base na acianidina B4 por ácidos graxos saturados (Cruz et al. 2015). Polifenóis e peptídeos de colágeno podem ser aplicados no desenho de produtos claros, através da formação de agregados lactoferrina (LF)-EGCG, que são destruídos principalmente através de mecanismos de competição com moléculas de EGCG (Yang et al. 2015a). O mecanismo e as propriedades estruturais dos agregados trivalentes de LF e pectina numa análise multiespectral mostram que a intensidade de fluorescência de LF diminui enquanto a de EGCG aumenta (Yang et al. 2015b). A análise espectral FTIR confirmou que as ligações de hidrogênio entre os grupos alifáticos, catequina e hidroxila aromática em gelatina foram responsáveis pela auto-montagem de nanopartículas. Em experiências com radicais livres, as catequinas podiam ser protegidas por nanopartículas e durar um período prolongado (Chen et al. 2010). Um método eficiente, preciso e confiável foi desenvolvido para quantificar catequinas de polifenóis e CE em solução de extrato de aguaraná usando um método HPLC-PDA (Klein et al. 2012). Três solventes diferentes e dois métodos de extração foram utilizados para comparar o conteúdo total de polifenóis e flavonóides dos extratos de tara pod. O teor total de polifenóis foi maior quando uma solução de etanol a 75% foi utilizada em um processo ultra-sônico de uma hora de duração, e o teor de flavonóides foi maior quando foi extraído por 24 h em água fria. Entretanto, os extratos de água foram eficazes apenas nos estágios iniciais do processo de oxidação, mostrando que 75% de extração de etanol é o melhor método para o isolamento do polifenol (Skowyra et al. 2013). Estudo assínergético entre parâmetros de processo revelou que o aumento do processo de tratamento ultra-sônico acelera significativamente a recuperação de antioxidantes fenólicos e reduz o tempo de processamento (Arruda et al. 2019). Extratos de procianidina de sementes de uva previnem danos à maioria dos tecidos e moléculas do tratamento com nanopartículas (Niu et al. 2017).