- Abstract
- 1. Introduction
- 2. Matériaux et méthodes
- 2.1. Organismes et conditions de culture
- 2.2. Préparation des extraits fongiques
- 2.3. Activité génoprotectrice
- 2.3.1. Sujets
- 2.3.2. Plan d’étude
- 2.3.3. Le test d’électrophorèse sur gel à cellule unique
- 2.4. Activité antioxydante
- 2.4.1. Essai DPPH-
- 2.4.2. Détermination du contenu phénolique total
- 2.4.3. Détermination de la teneur totale en flavonoïdes
- 2,5. Analyse statistique
- 3. Résultats et discussion
- 3.1. Rendement d’extraction
- 3.2. Activité génoprotectrice
- 3.3. Activité antioxydante
- 4. Conclusion
- Conflit d’intérêts
- Remerciements
Abstract
Les espèces de Trametes sont utilisées depuis des milliers d’années dans la médecine traditionnelle et conventionnelle pour le traitement de divers types de maladies. L’objectif était d’évaluer les éventuels effets antigénotoxiques des extraits de mycélium et de basidiocarpe de certaines espèces de Trametes et d’évaluer la dépendance à leur potentiel antioxydant. Les espèces étudiées étaient Trametes versicolor, T. hirsuta et T. gibbosa. Les potentiels antigénotoxiques des extraits ont été évalués sur des globules blancs périphériques humains avec des extraits de basidiocarpe et de mycélium des espèces. Le test alcalin des comètes a été utilisé pour détecter les ruptures de brins d’ADN et les sites labiles aux alcalis, ainsi que l’étendue de la migration de l’ADN. Le test DPPH a été utilisé pour estimer les propriétés antioxydantes des extraits. Les extraits de corps fructifères de T. versicolor et T. gibbosa ainsi que les extraits de T. hirsuta, sauf celui à 20,0 mg/mL, n’étaient pas des agents génotoxiques. L’extrait de T. versicolor a eu, à 5,0 mg/mL, l’effet antigénotoxique le plus important, tant avant qu’après le traitement des leucocytes. Les extraits de mycélium des trois espèces n’avaient pas d’activité génotoxique et un effet antigénotoxique significatif contre les dommages à l’ADN induits par H2O2, à la fois en pré et post-traitement. Les résultats suggèrent que les extraits de ces trois espèces pourraient être considérés comme des agents antigénotoxiques forts capables de stimuler la réponse génoprotectrice des cellules.
1. Introduction
Les champignons sont utilisés depuis longtemps comme aliment mais également dans la médecine traditionnelle du monde occidental et oriental . Même si de nombreux champignons sont reconnus comme des aliments sains , leur grand potentiel pharmacologique est encore sous-utilisé . Près de 60 espèces de Trametes sont connues dans le monde, mais seules quelques-unes d’entre elles sont étudiées pour leurs propriétés médicinales. Trametes versicolor (L.:Fr.) Lloyd est l’espèce médicinale la plus connue du genre. Cette espèce, dont les noms populaires sont queue de dinde dans les cultures occidentales, Yun-Zhi (champignon en forme de nuage) en Chine, ou Kawaratake (champignon au bord de la rivière) au Japon, est utilisée depuis des milliers d’années dans la médecine traditionnelle, en particulier en Asie. Selon le Compendium of Chinese Materia Medica, rédigé sous la dynastie Ming, plus de 120 souches de T. versicolor ont été répertoriées. Dans la pratique de la médecine traditionnelle chinoise, ce champignon est considéré comme utile pour éliminer les toxines, renforcer, augmenter l’énergie, améliorer les fonctions du foie et de la rate et renforcer la réponse immunitaire, surtout lorsqu’il est séché, broyé et préparé en thé . Toutes ces propriétés étaient considérées comme très utiles dans la médecine populaire pour l’utilisation chronique des préparations de Trametes spp. En médecine conventionnelle, l’espèce est utilisée principalement pour le traitement de divers types de cancers, mais aussi pour l’hépatite chronique, l’arthrite rhumatoïde et les infections des voies respiratoires, urinaires et digestives, ce qui a été confirmé par de nombreuses études . De plus, de forts effets antiviraux de certains polysaccharopeptides isolés de T. versicolor et une activité antioxydante significative des extraits de fructifications de Trametes spp. ont été rapportés. Ces effets sont principalement basés sur la production du polysaccharide krestin (PSK) et de divers complexes polysaccharide-peptide, composés qui réduisent les métastases cancéreuses et stimulent la production d’interleukine-1 dans les cellules humaines .
La présence abondante de radicaux libres dans l’environnement est associée à l’apparition du stress oxydatif qui est une base du vieillissement et de l’initiation et de la progression de diverses maladies et troubles dont souffre et meurt une grande partie de la population mondiale . L’ADN est plus sensible aux dommages oxydatifs que les autres macromolécules. Les dommages à l’ADN, tels que les ruptures de brins, peuvent être induits par divers agents parmi lesquels le H2O2 produit un effet génotoxique. Il est connu que ces dommages peuvent affecter la réponse immunitaire non seulement dans les maladies inflammatoires mais aussi dans les cancers. Le test des comètes est un test bien établi et efficace de haute sensibilité qui a été utilisé pour examiner les dommages à l’ADN et peut être appliqué pour évaluer le potentiel génotoxique et protecteur de plusieurs produits naturels.
Une activité génoprotectrice des extraits de champignons basée sur la réduction des dommages oxydatifs de l’ADN peut également jouer un rôle important dans la prévention et le traitement de plusieurs maladies et troubles mentionnés, mais très peu d’études jusqu’à aujourd’hui l’ont considéré comme un outil d’action possible dans différentes thérapies . Par conséquent, le but de cette étude était d’évaluer les effets antigénotoxiques des extraits de mycélium et de basidiocarpe de certaines espèces de Trametes sur les globules blancs périphériques humains et d’évaluer la dépendance à leur potentiel antioxydant.
2. Matériaux et méthodes
2.1. Organismes et conditions de culture
Des cultures de Trametes versicolor BEOFB 321, T. hirsuta BEOFB 301, et T. gibbosa BEOFB 310 ont été isolées à partir de fructifications collectées en Serbie et maintenues sur un milieu Malt agar dans la collection de cultures de l’Institut de Botanique, Faculté de Biologie, Université de Belgrade (BEOFB).
L’inoculum a été préparé par inoculation de 100,0 ml de milieu synthétique (glucose, 10.0 g L-1 ; NH4NO3, 2,0 g L-1 ; K2HPO4, 1,0 g L-1 ; , 0,4 g L-1 ; , 0,5 g L-1 ; extrait de levure, 2,0 g L-1 ; pH 6,5) avec 25 disques mycéliens (Ø 0.5 cm, provenant d’une culture de 7 jours sur gélose de malt) dans des flacons de 250 mL et incubation sur un agitateur rotatif à 100 rpm, à température ambiante (°C) pendant 7 j. La biomasse résultante a été lavée et homogénéisée avec 100,0 mL d’eau distillée stérile (dH2O) dans un mélangeur de laboratoire. La biomasse homogénéisée (30,0 mL) a été utilisée pour l’inoculation de 500,0 mL de milieu synthétique modifié (avec du glucose présent à 65,0 g L-1). La culture submergée a été réalisée dans des flacons de 1000 mL à température ambiante sur un agitateur rotatif pendant 21 d. La biomasse obtenue a été filtrée, lavée 3 fois avec du dH2O sur un agitateur magnétique, et séchée à 50°C jusqu’à un poids constant.
2.2. Préparation des extraits fongiques
Les fructifications et le mycélium séchés (3,0 g) ont été extraits par agitation avec 90,0 mL d’éthanol à 96% à 30°C pendant 72 h. Les extraits obtenus ont été centrifugés (20°C, 3000 rpm, 15 min) et les surnageants ont été filtrés à travers un papier filtre Whatman numéro 4, concentrés sous pression réduite dans un évaporateur rotatif (BÜCHI R-114, Suisse) à 40°C jusqu’à siccité, et redissous dans de l’éthanol à 96% pour le dosage des antioxydants ou dans de l’eau pour le dosage des antigénotoxiques jusqu’à une concentration initiale de 20,0 mg mL-1. Le rendement d’extraction a été exprimé en pourcentage sur une base de poids sec.
2.3. Activité génoprotectrice
2.3.1. Sujets
Des échantillons de sang total hépariné ont été obtenus par ponction veineuse chez trois donneurs sains âgés de moins de 25 ans. Les participants à l’étude étaient des non-fumeurs et des non-alcooliques, ne recevant aucune thérapie ni aucun médicament et ne prenant aucun complément alimentaire.
2.3.2. Plan d’étude
La génotoxicité de tous les extraits et de toutes les concentrations (20,0, 10,0, 5,0, 2,5, 1,25, 0,625 et 0,312 mg mL-1) a été étudiée par traitement de globules blancs périphériques humains à 37°C pendant 30 min dans le but d’évaluer les dommages à l’ADN. Normalement, les globules blancs sont utilisés, car ils sont obtenus de manière relativement non invasive, ne nécessitent pas de désagrégation des tissus et se comportent bien dans le test des comètes . Le traitement avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) à 37°C pendant 30 min a été utilisé comme contrôle positif et le traitement avec 25,0 μM H2O2 sur glace pendant 15 min comme contrôle négatif.
Deux protocoles indépendants ont été utilisés pour évaluer le potentiel antigénotoxique des extraits, en utilisant le prétraitement et le post-traitement avec les extraits. En prétraitement, les cellules ont été incubées avec les extraits à 37°C pendant 30 min, puis lavées avec du PBS, et exposées à H2O2 pendant 15 min. Dans le post-traitement, les cellules ont été traitées avec H2O2 sur la glace pendant 15 minutes, rincées avec du PBS, et ensuite traitées avec les sept concentrations d’extraits à 37°C pendant 30 minutes. Après chaque traitement, les cellules ont été lavées avec du PBS. L’incubation avec du PBS à 37°C pendant 30 min était le contrôle négatif et le traitement avec 25,0 μM H2O2 sur glace pendant 15 min représentait le contrôle positif.
Trois répétitions ont été effectuées pour chaque expérience et 100 noyaux ont été analysés pour chacune.
2.3.3. Le test d’électrophorèse sur gel à cellule unique
Le test des comètes a été réalisé comme décrit par Singh et al . Le test alcalin des comètes est capable de détecter les ruptures de brins d’ADN et les sites labiles en milieu alcalin, et l’ampleur de la migration de l’ADN indique le degré de dommages à l’ADN dans les cellules.
Les échantillons de sang total (6,0 μL) ont été mis en suspension dans de l’agarose à 0,67 % à bas point de fusion (LMP) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) et pipetés sur des lames de microscope en verre surgelées prérevêtues d’une couche d’agarose à point de fusion normal de 1 % (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), étalés à l’aide d’une lamelle couvre-objet et maintenus sur la glace pendant 5 min pour se solidifier. Après avoir retiré délicatement les lamelles, les suspensions cellulaires sur les lames ont été traitées avec les extraits et le H2O2 comme décrit ci-dessus. Après les traitements, toutes les lames ont été recouvertes de la troisième couche d’agarose LMP à 0,5 % et ont été à nouveau laissées à l’état solide sur la glace pendant 5 minutes. Après avoir retiré les lamelles, les lames ont été placées dans une solution de lyse froide (2,5 M NaCl, 100 mM EDTA, 10 mM Tris, 1 % Triton X100 et 10 % diméthylsulfoxyde, pH 10,0 ajusté avec NaOH) à 4°C pendant une nuit et ont ensuite été soumises à une électrophorèse et à une coloration au bromure d’éthidium. Les comètes ont été observées et analysées à l’aide d’un microscope Olympus ×50 (Olympus Optical Co., Gmbh Hamburg, Germany), équipé d’un dispositif d’enregistrement de la fluorescence à un grossissement de 100x. L’évaluation des dommages à l’ADN a été réalisée selon la méthode décrite par Anderson et al. . A savoir, les cellules ont été classées à l’œil en cinq catégories correspondant aux quantités suivantes d’ADN dans la queue : (A) aucun dommage, <5% ; (B) dommage de faible niveau, 5-20% ; (C) dommage de niveau moyen, 20-40% ; (D) dommage de niveau élevé, 40-95% ; (E) dommage total, >95% (Figure 1). L’analyse a été effectuée sur 100 cellules sélectionnées au hasard par sujet (50 cellules de chacune des 2 lames répétées). Pour obtenir une analyse semi-quantitative des données, les dommages à l’ADN ont été caractérisés par une migration de l’ADN supérieure à 5 % (classes de comètes B + C + D + E).
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2.4. Activité antioxydante
2.4.1. Essai DPPH-
L’activité antioxydante a été définie en mesurant le blanchiment de la solution méthanolique de couleur violette du radical stable 1,1-diphényl-2-picrylhydrazyl () . Les effets de piégeage ont été mesurés par spectrophotométrie (CECIL CE 2501) à 517 nm et calculés à l’aide de l’équation : où est l’absorbance du contrôle négatif (mélange réactionnel sans extrait) et est l’absorbance du mélange réactionnel.
La concentration de l’extrait (mg d’extrait/mL) fournissant 50% de réduction (EC50) a été obtenue par interpolation à partir d’une analyse de régression linéaire. Toutes les mesures ont été effectuées en triplicata pour l’analyse statistique. L’antioxydant commercial, l’hydroxyanisole butylé (BHA), dans une gamme de concentration de 20,0 mg mL-1-0,02 mg mL-1, a été utilisé comme contrôle positif.
2.4.2. Détermination du contenu phénolique total
Les composés phénoliques totaux dans les extraits mycéliens ont été estimés avec le réactif de Folin-Ciocalteu selon la méthode de Singleton et Rossi , en utilisant l’acide gallique comme standard. La concentration a été déterminée en μg d’équivalents d’acide gallique (GAE) par mg d’extrait sec, en utilisant une équation qui a été obtenue à partir d’un graphique standard d’acide gallique comme
2.4.3. Détermination de la teneur totale en flavonoïdes
La teneur totale en flavonoïdes a été déterminée par les méthodes de Park et al. en utilisant la quercétine comme étalon. La quantité a été exprimée en μg d’équivalents de quercétine (QE) par mg d’extrait sec, en utilisant une équation obtenue à partir d’un graphique standard de quercétine hydratée comme
2,5. Analyse statistique
Les résultats ont été exprimés comme la moyenne ± l’erreur standard des données obtenues à partir de trois mesures parallèles. Une analyse de variance à sens unique (ANOVA) a été réalisée à l’aide du logiciel STATISTIKA, version 5.0 (StatSoft Inc.) pour tester toute différence significative. Les valeurs inférieures à 0,01 ont été considérées comme statistiquement significatives. L’analyse statistique des données issues du test des comètes a été réalisée par le test de χ2 à l’aide du logiciel Statgraph 4.2. Pour réaliser le test de χ2, les résultats des trois expériences ont été regroupés et nous avons évalué le nombre total de cellules présentant des dommages à l’ADN. Une différence à a été considérée comme statistiquement significative.
3. Résultats et discussion
3.1. Rendement d’extraction
Les rendements d’extraction de la biomasse du mycélium pour les trois espèces étaient significativement plus élevés par rapport au corps fructifère (). T. gibbosa avait le rendement d’extraction le plus élevé de la biomasse de mycélium séché (34,6 %) et le rendement le plus faible des corps fructifères séchés (2,2 %). Le rendement d’extraction le plus élevé des fructifications (6,67 %) a été trouvé chez T. versicolor, dont le rendement d’extraction du mycélium était de 8,0 %. Les rendements chez T. hirsuta étaient de 12,0 % (pour le mycélium) et de 2,85 % (pour les organes fructifères). Les différences de rendement d’extraction entre les espèces, tant pour le mycélium que pour le corps fructifère, étaient statistiquement significatives ().
Des rapports antérieurs ont montré la dépendance de l’extractibilité de la biomasse à l’égard de l’espèce, de la souche et du solvant . Ainsi, Ren et al. ont constaté que les rendements d’extraction du basidiocarpe de T. gibbosa étaient de 1,22 % pour l’extrait d’éther de pétrole, de 6,44 % pour l’acétate d’éthyle et de 9,2 % pour les extraits de méthanol. Le méthanol était également un bon solvant pour le basidiocarpe de T. versicolor dont le rendement variait entre 4,1% et 9,16%. Sur la base de nos résultats, on peut conclure que les alcools sont les meilleurs solvants, mais l’éthanol est plus faible que le méthanol.
3.2. Activité génoprotectrice
Comme tous les donneurs de sang étaient en bonne santé et d’âge similaire et ne prenaient aucun médicament, l’analyse statistique n’a pas montré de différences claires dans leurs réponses aux extraits. Par conséquent, les résultats des trois expériences ont été regroupés. Le traitement des leucocytes du sang périphérique avec H2O2 a provoqué une induction rapide et puissante de cassures simple brin dans l’ADN nucléaire, qui était visible dans le test des comètes comme migration de l’ADN.
Nos résultats ont démontré que les extraits de corps fructifères de T. versicolor de 0,312 à 20.0 mg mL-1 n’a provoqué aucune augmentation significative du nombre total de cellules endommagées par l’ADN par rapport au témoin positif, ce qui montre clairement que l’extrait testé n’est pas un agent génotoxique (figure 2(a) (A)). La distribution (valeur) des dommages totaux à l’ADN était également la même que dans le contrôle positif. D’autre part, ces extraits ont montré des effets protecteurs contre H2O2 à la fois en pré et post-traitement des leucocytes (Figure 2(a) (B, C)). L’extrait à 5,0 mg mL-1 a eu l’effet le plus important et à 20,0 mg mL-1 l’effet le plus faible dans les deux traitements. La valeur des dommages totaux à l’ADN a statistiquement diminué par rapport au contrôle positif dans toutes les concentrations ().
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L’extrait de corps fructifères de T. hirsuta à toutes les concentrations, sauf à 20,0 mg mL-1, n’a montré aucune activité génotoxique, car le niveau de dommages totaux à l’ADN n’était pas statistiquement plus élevé que celui du témoin positif (figure 2(b) (A)). Cependant, à une concentration de 20,0 mg mL-1, l’effet génotoxique et les dommages totaux à l’ADN dans les cellules étaient statistiquement différents de ceux du témoin positif. Dans les prétraitements et post-traitements des leucocytes, l’extrait à toutes les concentrations, sauf la plus élevée, a présenté un effet protecteur contre les dommages à l’ADN induits par H2O2, montrant une diminution significative des dommages totaux à l’ADN par rapport au contrôle positif (Figure 2(b) (B, C)). Ces traitements ont montré une corrélation dose-dépendante, avec le plus grand effet protecteur à une concentration d’extrait de 0,312 mg mL-1, tandis que la concentration de 20 mg mL-1 n’a montré aucune protection contre les comètes induites par H2O2.
L’absence d’un effet génotoxique ainsi que d’un effet antigénotoxique significatif, c’est-à-dire la réduction des dommages à l’ADN induits par H2O2, à la fois avant et après le traitement, a également été notée pour l’extrait de corps fructifères de T. gibbosa aux sept concentrations (Figure 2(c)). Cependant, contrairement aux extraits de T. hirsuta, une réponse dose-dépendante n’a pas été observée pour les extraits de basidiocarpe de T. gibbosa ; à savoir, une diminution progressive de la concentration de l’extrait ne correspondait pas à une réduction proportionnelle de la génotoxicité induite par H2O2.
Les extraits de mycélium de T. versicolor, T. hirsuta et T. gibbosa, à toutes les concentrations analysées, n’ont présenté aucune activité génotoxique (figures 3(a) (A), 3(b) (A) et 3(c) (A)). Tous les extraits de mycélium et toutes les concentrations ont montré un effet antigénotoxique significatif contre les dommages à l’ADN induits par H2O2, tant en prétraitement qu’en post-traitement, et ces activités n’étaient pas sensiblement différentes. Chez T. versicolor, une activité légèrement inférieure a été notée à la concentration la plus faible de l’extrait. Chez T. hirsuta, les concentrations de 5,0, 2,5 et 20,0 mg mL-1 ont été plus efficaces, tandis que chez T. gibbosa, le plus grand effet protecteur a été observé à une concentration de 2,5 mg mL-1 et le plus faible à 20,0 mg mL-1 (Figures 3(a) (B, C), 3(b) (B, C) et 3(c) (B, C)).
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De nombreux composés mutagènes et cancérigènes sont présents dans différentes sources naturelles . D’autre part, certains composés naturels pourraient être soit des prooxydants provoquant des effets génotoxiques et/ou cytotoxiques, soit des antioxydants, selon la concentration et la durée d’exposition . Les espèces de champignons à haute valeur nutritionnelle et médicinale peuvent avoir des effets différents in vitro et in vivo en raison de leur instabilité dans les conditions de digestion ou de leur incapacité d’absorption par le tractus gastro-intestinal. Ainsi, les activités obtenues in vitro ne correspondent pas nécessairement à celles constatées in vivo. Il est également important de souligner que les effets génotoxiques et antigénotoxiques des extraits de champignons dépendent de l’espèce, de la concentration et du test utilisé pour leur évaluation. Ainsi, nos résultats ont démontré des capacités différentes des trois espèces de Trametes à diminuer les dommages à l’ADN induits par H2O2 ; par exemple, l’activité la plus faible a été observée dans l’extrait de corps fructifère de T. hirsuta. Une relation dose-réponse inverse claire entre le niveau de dommages à l’ADN et la concentration de l’extrait a été notée uniquement dans l’extrait de basidiocarpe de T. hirsuta. Cependant, chez T. versicolor et T. gibbosa, l’augmentation de la concentration de l’extrait au-delà de la dose optimale n’a pas entraîné d’amélioration des résultats des comètes, ce qui confirme les résultats de Miyaji et al. . Ces auteurs ont montré l’absence d’une relation dose-réponse entre les concentrations d’extraits de Lentinus edodes et leur effet antigénotoxique. Il est important de mentionner que les ingrédients phénoliques, flavonoïdes et autres combinés dans les extraits devraient avoir un plus grand potentiel que les composants individuels des extraits, indiquant l’importance des coactions de tous les ingrédients. Cette constatation pourrait entraîner une tendance différente de l’activité antigénotoxique de Trametes spp. La dépendance de l’activité génotoxique de l’extrait par rapport au type de test a été démontrée par Morales et al. ; c’est-à-dire qu’ils ont rapporté l’absence d’effet mutagène des extraits de basidiocarpe de Lactarius deliciosus, Boletus luteus, Agaricus bisporus, et Pleurotus ostreatus sur les cellules de mammifères en utilisant le test de Ames Salmonella/microsome. Cependant, une faible activité de l’extrait de P. ostreatus a été obtenue en utilisant le test CHO/HPRT.
Les mécanismes sous-jacents de l’effet antigénotoxique des extraits de champignons ne sont pas encore complètement connus. Les effets protecteurs des extraits semblent être basés sur plus d’un mécanisme d’action, ce qui n’est pas rare pour les champignons selon Gebhart . Les mécanismes d’antigénotoxicité ont pu être évalués par des applications de pré et post-traitements, c’est-à-dire diverses combinaisons d’extraits et de H2O2. Nos résultats positifs dans les deux traitements indiquent que les extraits ont des effets protecteurs à la fois au niveau de la prévention et de l’intervention et peuvent agir comme desmutagènes et bioantimutagènes, ce qui a également été démontré par des études antérieures . L’efficacité du prétraitement, constatée dans la présente étude, pourrait s’expliquer par l’augmentation de la capacité antioxydante des cellules, c’est-à-dire la stimulation de la synthèse et de l’activité des enzymes antioxydantes pendant l’induction du stress oxydatif . L’effet positif du post-traitement pourrait être le résultat d’une action synergique des activités d’intervention via le piégeage des radicaux libres et la stimulation des enzymes antioxydantes, ainsi que l’excitation de la réparation de l’ADN, comme l’ont suggéré Chiaramonte et al . Comme ces auteurs ont signalé une réparation significative des dommages à l’ADN après 30-60 min d’exposition à un agent oxydant, on pourrait conclure que la réparation de l’ADN a joué un rôle moins important dans la protection contre le H2O2 puisque les conditions de post-traitement ont considéré jusqu’à 30 min d’incubation. Par conséquent, l’activité génoprotectrice des extraits de Trametes spp. est probablement basée sur des actions antioxydantes. D’autre part, il est connu que les organismes eucaryotes ont développé une voie de signalisation, appelée la réponse aux dommages de l’ADN, pour se protéger contre les insultes génomiques. Gasser et Raulet ont démontré que la réponse aux lésions de l’ADN alerte le système immunitaire en induisant l’expression de ligands à la surface des cellules pour le récepteur immunitaire activateur NKG2D, qui est exprimé par les cellules tueuses naturelles (cellules NK) et certains lymphocytes T. Par conséquent, l’activité génoprotectrice de Trametes spp. dans les cellules exposées à des agents génotoxiques pourrait moduler la réponse aux dommages de l’ADN et fonctionner comme une barrière dans la tumorigenèse précoce. Les recherches ultérieures devraient inclure l’analyse des niveaux de superoxyde dismutase et de catalase dans les lymphocytes traités avec des extraits de Trametes spp., à la fois en pré et post-traitement avec H2O2, afin de confirmer l’hypothèse selon laquelle l’amélioration de la capacité antioxydante dans les cellules est induite par ces extraits.
3.3. Activité antioxydante
Les extraits éthanoliques testés étaient de bons antioxydants mais leur activité dépendait de l’espèce. Les extraits de corps fructifiés ont montré des effets de piégeage significativement plus élevés que les extraits de mycélium (). L’activité de piégeage des radicaux DPPH la plus élevée a été détectée dans les extraits de T. versicolor, à la fois dans le corps fructifiant et le mycélium (63,5 % et 59,4 %, respectivement), ce qui a été confirmé par les valeurs EC50 (15,22 mg mL-1 et 16,18 mg mL-1, respectivement). Un niveau d’activité légèrement inférieur a été trouvé pour les extraits de T. hirsuta (59,0% pour les basidiocarpes et 46,8% pour le mycélium), dont les concentrations de 17,06 mg mL-1 et 21,81 mg mL-1, respectivement, ont fourni une réduction de 50% des radicaux. T. gibbosa était l’espèce présentant le plus faible potentiel de piégeage, notamment pour les extraits de mycélium (39,7 %) avec une valeur EC50 de 26,15 mg mL-1. Cependant, la capacité de piégeage des radicaux de l’extrait du corps fructifère n’était pas significativement inférieure à celle des deux autres espèces (53,7 % et CE50 de 18,13 mg mL-1). L’activité de piégeage de l’antioxydant synthétique BHA était de 94,28 %, et une concentration de 0,10 mg mL-1 a fourni une réduction de 50 %.
Les teneurs totales en phénol dans les extraits de corps fructifères et de mycélium des espèces de Trametes étaient significativement différentes () (Tableau 1). En général, les teneurs en phénol dans les extraits de corps fructifères étaient plus élevées que dans les extraits de mycélium.
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Les extraits de basidiocarpe et de mycélium de T. versicolor étaient les plus riches en phénols et en flavonoïdes, tandis que les concentrations les plus faibles ont été mesurées dans les extraits de T. gibbosa. Selon les concentrations en phénols et en flavonoïdes, les extraits de T. hirsuta se situaient entre les extraits des deux autres espèces (Tableau 1). Le degré de corrélation entre l’activité de piégeage des extraits et les teneurs en phénol et en flavonoïdes était élevé avec pour les fructifications de 0,98 et 0,99, respectivement, et pour le mycélium de 0,97 et 0,99, respectivement.
Des études antérieures ont également indiqué le potentiel antioxydant des espèces de Trametes . Ainsi, Kamiyama et al. ont démontré qu’une concentration d’extrait même de 0,5 mg mL-1 piégeait près de 50 % des selon le solvant, tandis que Johnsy et Kaviyarasana ont noté une réduction même de 91,5 % des radicaux par un extrait méthanolique de basidiocarpes de T. gibbosa à une concentration de 1,0 mg mL-1. Les extraits éthanoliques testés dans notre étude avaient des capacités légèrement inférieures, mais supérieures aux extraits éthanoliques de corps fructifères de T. hirsuta analysés par Sheikh et al. .
Selon Mau et al et Palacios et al, les composés phénoliques jouent un rôle clé dans l’activité antioxydante. Ces composés sont des constituants très abondants et importants des fructifications et des mycéliums des champignons. Leur capacité est basée sur la présence de groupes hydroxyles agissant comme agents réducteurs, chélateurs de métaux, extincteurs d’oxygène singlet et donneurs d’hydrogène. Cependant, dans certains cas, leur activité n’a pas pu être attribuée à la teneur totale en phénols des extraits, ce qui est confirmé par la comparaison de nos résultats avec ceux de Johnsy et Kaviyarasana . À savoir, 91,5 % de a été réduit par l’extrait de basidiocarpe de T. gibbosa contenant 23,8 μg GAE mg-1 d’extrait, tandis qu’un extrait de la souche BEOFB 310 avec une concentration en phénol de 20,07 μg GAE mg-1 d’extrait n’a piégé que 63,5 % des radicaux. Cependant, la concentration de flavonoïdes dans la souche serbe de T. gibbosa était significativement plus élevée par rapport à la souche testée par Johnsy et Kaviyarasana (7,63 μg QE mg-1 d’extrait et 0,59 μg QE mg-1 d’extrait, respectivement), et cela pourrait s’expliquer par les différentes polarités des solvants ainsi que par les différentes capacités de la souche pour la synthèse des flavonoïdes .
4. Conclusion
Cette étude a été la première tentative d’évaluer l’activité protectrice de l’ADN des extraits de T. versicolor, T. hirsuta, et T. gibbosa et détermine si cela était basé sur leur potentiel antioxydant. Les résultats suggèrent que les extraits de ces trois espèces pourraient être considérés comme de puissants agents antigénotoxiques capables de stimuler la réponse génoprotectrice des cellules contribuant à améliorer la fonction immunitaire, l’élimination des toxines et le renforcement, ce qui renvoie à l’utilisation traditionnelle. Cependant, des recherches supplémentaires sont nécessaires pour révéler les porteurs spécifiques de l’activité antigénotoxique et le mode de protection de l’ADN contre les dommages oxydatifs.
Conflit d’intérêts
Les auteurs déclarent qu’ils n’ont aucun conflit d’intérêts concernant la publication de cet article.
Remerciements
Les auteurs remercient le professeur Dr Steve Quarrie, professeur invité à l’Université de Newcastle, Royaume-Uni, pour la révision et l’amélioration de l’anglais. Cette étude a été réalisée avec le soutien financier du ministère de l’Éducation, des Sciences et du Développement technologique de la République de Serbie, projet n° 173032 et projet n° 173034.
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