Ajoitetut tiineet hiiret ja rotat ovat tärkeitä tutkimusvälineitä, joita voidaan käyttää kehitystutkimuksessa, geenitekniikassa ja kudosviljelmien tuottamisessa. Ne ovat tehokkain tapa saada kohortti alkioita, sikiöitä tai pentuja, joilla on tarkasti määritetty, sopiva ikä. Mutta mitä tarkalleen ottaen ovat ajoitetut tiineet hiiret?
Mitä ovat ajoitetut tiineet hiiret ja rotat?
Ajoitetut tiineet naaraat ovat hiiriä tai rottia, joilla on tarkasti tiedossa oleva astutuspäivä. Tämä mahdollistaa joko alkioiden tai sikiöiden keräämisen halutussa tiineysiässä tai haluttuna päivänä syntyneiden pentueiden tuottamisen.
Tällaiset ajoitetut astutukset toteutetaan asettamalla astutukset tietylle päivälle ja tarkistamalla, onko seuraavana päivänä havaittavissa merkkejä parittelusta. Naaraat, jotka osoittavat merkkejä kopulaatiosta (siittiöitä hiirillä, positiivisia emättimen näytteitä rotilla), eristetään. Näin pariutuminen – ja oletettavasti hedelmöittyminen – ajoittuu tiettyyn vuorokauden mittaiseen ajanjaksoon.
Taconic Biosciencesissa naaraiden siittiöiden havaitsemispäivää kutsutaan ”siittiöpositiiviseksi päivämääräksi”, ja sitä pidetään tiineyden ensimmäisenä päivänä (kaikki ajoitetut tiineysmallit on tilattava siittiöpositiivisen päivämäärän mukaan).
Tiineyden alkuvaiheessa tiineyden varmistaminen silmämääräisesti havainnoimalla tai tunnustelemalla on vaikeaa. Neljäntoista päivän kohdalla raskaus voidaan vahvistaa visuaalisen havainnoinnin ja kohdussa olevien pentujen tunnustelun avulla.
Embryoninen diapause ajoitetuilla tiineillä hiirillä ja rotilla
Traskausajan määrittämiseen käytetään useita menetelmiä, kuten kehitystä, painoa, kokoa ja ulkonäköä, mutta pentueen koko vaikuttaa näihin tekijöihin. Rottien ja hiirten osalta UNSW:n verkossa on saatavilla erinomainen viite.
Alkioiden ja sikiöiden kehitys etenee tyypillisesti tarkoin määriteltyä aikataulua pitkin, mutta tutkijat havaitsevat toisinaan, että sato näyttää koostuvan alkioista tai sikiöistä, jotka ovat nuorempia kuin tiedossa oleva tiineyspituus antaisi olettaa.
Embryoninen diapause voi olla todennäköinen syyllinen niissä tapauksissa, joissa alkiot tai sikiöt näyttävät odotettua nuoremmilta. Alkiodiapaussi on alkion kehityksen tilapäinen pysähtyminen, joka tapahtuu ennen blastokystan istutusta. Tämä voi johtua ympäristöstressitekijöistä tai äidin vaikutuksesta, kuten imetyksestä1. Tämän seurauksena alkion todellinen kehitysnopeus voi poiketa nimellisestä raskausajasta.
Preferred Strains and Stocks for Timed Mating
| Model | Breeding Age | Littering Size | Typical Gestation |
| Swiss Webster | 8 weeks | 11 puppua | 19 – 20 päivää |
| Black 6 | 8 viikkoa | 7 pentua | 18 – 20 päivää |
| Sprague Dawley® | 8 – 10 viikkoa | 10 pentua | 21 – 23 päivää |
Rotat
Erinomaisen lisääntymiskyvyn ansiosta Sprague Dawley® -malli on ensisijainen valinta ajoitettujen tiineiden naarasrottien tuottamiseen. Ajastettujen tiineiden Sprague-Dawley®-rottien alkioita käytetään alkionkehityksen, teratologian ja lisääntymistoksikologian tutkimuksessa sekä kokeissa, joissa käytetään sikiökudosta tietyistä alkio-ikäisistä rotista.
Hiiret
Sveitsiläisen Webster-hiiren lisääntymisominaisuudet ovat myös ylivoimaiset, ja se on erinomainen valinta kokeisiin, joissa hyväksytään rodusta riippumaton hiirimalli. Jos tarvitaan sisäsiittoista kantaa, käytetään yleisesti Black 6 -hiirtä. Ajastetuilla tiineillä Swiss Webster -hiirillä saadaan tyypillisesti suurempi alkio-/sikiötuotos kuin Black 6 -hiirellä, jonka pentuekoko on pienempi.
Ajastettujen tiineiden hiirten ja rottien sovellukset
Ajastettuja tiineitä eläimiä käytetään laajalti geenitekniikassa, kudosviljelmien kehittämisessä ja kehitystutkimuksessa. Kyky kerätä alkioita ja sikiöitä tietyissä tiineysvaiheissa on kriittinen näissä tutkimuksissa.
- Embryonkorjuu (yleensä superovulaation ja ajoitetun astutuksen jälkeen) on kriittinen vaihe geneettisesti muunnettujen eläinmallien luomisessa. Zygootteja käytetään tyypillisesti pronukleaarisiin mikroinjektioihin (mukaan lukien CRISPR-geenieditointi), kun taas blastokystat korjataan myöhemmässä vaiheessa ja niitä käytetään luovuttajaalkioina muunnettujen alkion kantasolujen injektioita varten.
- Hiiren ja rottien alkioita ja sikiöitä käytetään yleisesti primaaristen kudosviljelmien, kuten hermosoluviljelmien tai hiiren alkion fibroblastiviljelmien, tuottamiseen.
- Ajoitettuja tiineitä hiiriä ja rottia käytetään yleisesti tutkimaan ruokavalion tai muiden syötteiden vaikutusta tiineyden aikana ja sen tuloksena syntyviin jälkeläisiin.
Katsele Taconic Biosciencesin webinaareja:
- Maailman tärkein hiiri – oppaasi C57BL/6-hiireen
- Hiiren ja rottien mutanttien nopea tuottaminen CRISPR/Cas-menetelmällä yksisoluisissa alkioissa
.
Vastaa