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DISCUSIÓN

Considerando que los animales estaban alojados en cabinas de aislamiento de transmisión de enfermedades, la recuperación de S. Agonanal+ y S. Typhimuriumnal+ de cerdos centinela en los ensayos da pruebas de que dichos patógenos pueden propagarse por el aire e infectar a cerdos destetados a corta distancia. Además, la macrorrestricción del ADN cromosómico y el perfil plasmídico de los aislados recuperados de los cerdos centinela e inoculados en cada ensayo mostraron patrones indistintos en comparación con la cepa respectiva utilizada como inóculo (datos no mostrados). Esto fue suficiente para rechazar la hipótesis nula y, por tanto, no se intentaron otros análisis estadísticos. Estos resultados confirman las indicaciones anteriores sobre la posibilidad de transmisión aérea de S. enterica en el ganado porcino. Además, la transmisión por aerosol de S. enterica ya se ha demostrado en aves de corral, terneros, ovejas y ratones.

Aunque se han realizado experimentos similares para comprobar la transmisión por aire de otros patógenos en cerdos, el presente informe es, según nuestros conocimientos, el primero que describe la transmisión por aire de S. enterica en cerdos utilizando armarios de aislamiento.

Se realizaron muestreos de hisopos rectales individuales para determinar el momento en que los cerdos empezaron a excretar Salmonella. Según nuestros resultados, se aisló Salmonella de los cerdos inoculados en ambos ensayos al principio del primer día después de la infección (Tablas 1 y 2), lo que concuerda con informes anteriores sobre la rápida eliminación de Salmonella después de la inoculación experimental.

En el ensayo I, un cerdo centinela (P6) mostró un patrón consistente de eliminación de S. Agonanal+ entre 11 y 15 DPI. En el ensayo II, sin embargo, se aisló S. Typhimurium de P11 a los 5 DPI, detectado sólo por PCR en hisopos rectales de P12 a los 2, 5 y 18 DPI. En el único informe disponible sobre la transmisión aérea de S. Typhimurium en el ganado porcino, no se aisló ninguna bacteria de los animales centinela expuestos al flujo de aire de una sala con cerdos infectados y sólo se observó seroconversión.

A pesar de la gran variación de tiempo y frecuencia de excreción de Salmonella que se observa en los cerdos expuestos, S. Typhimurium puede aislarse rápidamente de las heces poco después de que se mezclen con animales que excretan este patógeno, o cuando se colocan en un entorno contaminado. Sin embargo, cuando los cerdos infectados y los cerdos centinela sólo tuvieron contacto de nariz a nariz, la mayoría de los cerdos expuestos eliminaron S. Typhimurium después de 5 semanas. Estos resultados podrían apoyar la hipótesis de que las heces contaminadas son una fuente importante de contaminación cruzada entre corrales.

La recuperación de S. Agonanal+ de las muestras de aire recogidas a la entrada de C3 durante cuatro días consecutivos en el ensayo I apoyan la hipótesis de que los cerdos centinela adquirieron la infección tras recibir aire contaminado de C2. El hecho de que S. Typhimurium+ no se recuperara de las muestras de aire en el ensayo II no refuta la hipótesis de la transmisión por aire. Aunque se ha considerado que el agar verde brillante da resultados superiores en comparación con otros medios selectivos para aislar Salmonella de muestras de aire, hay que recordar que el aislamiento de bacterias patógenas específicas del aire ambiental en instalaciones animales es siempre difícil, y los resultados son frecuentemente negativos en caso de contaminación extensa por microorganismos saprofitos.

Considerando las 387 muestras que se analizaron tanto por aislamiento como por PCR, hubo una concordancia sustancial entre las dos pruebas. El coeficiente kappa (0-77) encontrado aquí confirma el éxito del uso del caldo Rappaport-Vassiliadis enriquecido como fuente de plantilla de ADN para la PCR como método adicional para mejorar la sensibilidad de la detección de Salmonella en muestras fecales porcinas . Se ha sugerido que el enriquecimiento permite diluir las sustancias inhibidoras y también aumentar el número de salmonelas en las heces . Diecinueve muestras fueron positivas por PCR y negativas por aislamiento, mientras que 21 muestras fueron positivas por aislamiento y negativas por PCR. Estos resultados discrepantes y el hecho de que se requiera el aislamiento de las bacterias para confirmar la hipótesis de transmisión en los ensayos experimentales sugieren que la PCR del cultivo en caldo de enriquecimiento podría utilizarse sólo como herramienta de diagnóstico de apoyo, y no como sustituto del aislamiento bacteriano.

El diseño experimental utilizado aquí no permite sacar conclusiones sobre los lugares de invasión de Salmonella en los cerdos centinela. La frecuencia de recuperación de Salmonella en ambos ensayos, es decir, la rápida contaminación ambiental en C3 antes de la identificación de la excreción de Salmonella por parte de los cerdos centinela, podría sugerir que estos animales adquirieron Salmonella a través de la ingestión, probablemente de superficies ambientales contaminadas por aerosoles de C2, incluyendo el pienso. Esta hipótesis está respaldada por el hecho de que los cerdos en edad de sacrificio pueden infectarse rápidamente cuando se exponen a un número relativamente bajo de S. Typhimurium en el medio ambiente.

Por otro lado, no se puede excluir la hipótesis de la inhalación de Salmonella por parte de los cerdos centinela. Utilizando cerdos esofagotomizados, Fedorka-Cray et al. demostraron que S. Typhimurium puede acumularse rápidamente en el intestino por vías distintas a la clásica vía oral de inoculación y dilucidaron la importancia del NALT como un importante portal de entrada de S. Typhimurium en los cerdos. Estos tejidos también pueden constituir importantes lugares de invasión para las bacterias presentes en las partículas de los alimentos y las heces, ya que el comportamiento de los cerdos asegura que dichas partículas suelen entrar en la cavidad nasal durante la alimentación y el hociqueo.

Es interesante el aislamiento de S. Agonanal+ en muestras de pulmón e hígado de P6, así como en tejidos del tracto digestivo, que sugieren una infección sistémica. Las infecciones sistémicas en cerdos se han documentado con frecuencia en experimentos que utilizan la vía respiratoria intranasal de inoculación, pero no se han descrito habitualmente en ensayos que utilizan la exposición oral . La secuencia de exposición, es decir, oral-respiratoria frente a respiratoria-oral, también podría afectar a la respuesta inmunitaria, lo que a su vez podría afectar a la gravedad de la enfermedad.

Las diferencias en la edad de los animales, el origen de los mismos, la humedad media y la temperatura no permiten realizar comparaciones directas entre los dos ensayos. La diferencia más importante entre los dos ensayos radica en el diferente estado inmunitario de los animales antes de la inoculación (Tabla 4). La media de MCOD en los animales de la granja A (ensayo I) fue sólo de 0-056, mientras que fue de 0-187 en los animales de la granja B (ensayo II). Tres animales del ensayo II (P7, P8 y P9) mostraron un MCOD superior al valor de corte estándar para la prueba (0-169), lo que indica la presencia de anticuerpos maternos contra Salmonella. A pesar de que se aisló S. Typhimurium+ en los tejidos recogidos de un cerdo centinela (P12) en el ensayo II, la presencia de inmunidad lactogénica podría explicar la ausencia de excreción de Salmonella por parte de los cerdos centinela durante todo el periodo experimental. De hecho, la presencia de anticuerpos maternos contra Salmonella podría proteger a los lechones durante las primeras semanas.

Dos cerdos centinela (P6 y P12) mostraron mayores títulos de anticuerpos contra Salmonella. Estos resultados corroboran los hallazgos anteriores sobre la detección de la respuesta inmune humoral después de la exposición a los aerosoles en los cerdos.

La disminución de los títulos observada en los cerdos infectados en el ensayo II podría deberse al agotamiento de los anticuerpos maternos después del desafío. Curiosamente, los cerdos infectados en el ensayo I no mostraron un aumento marcado de los títulos de anticuerpos. Esta baja respuesta serológica podría atribuirse a la edad relativamente baja de los cerdos y al periodo experimental relativamente corto. De hecho, se ha demostrado que la seroconversión varía sustancialmente entre los cerdos inoculados (6-37 días) y la seroconversión suele alcanzar su punto máximo alrededor de los 30 DPI . En los cerdos infectados de forma natural, este lapso de tiempo entre la infección y la seroconversión puede ser incluso mayor.

La falta de conocimiento y la complejidad de la epidemiología de Salmonella en los sistemas modernos de producción porcina se consideran los mayores problemas para controlar estas bacterias en las granjas. Se han publicado numerosos informes sobre el impacto de la nutrición, los sistemas de producción, la gestión y las estrategias de transporte/vigilancia en la reducción de Salmonella en el ganado porcino y se suele tomar el ciclo fecal-oral de la infección como base para el análisis epidemiológico. Por otro lado, se ha prestado poca atención a la propagación, contaminación e infección de Salmonella a través de los aerosoles en los cerdos. Queda por aclarar si esta vía de transmisión puede ser también motivo de preocupación en la epidemiología de la Salmonella en los sistemas de producción porcina intensiva. En las aves de corral, sin embargo, ya se ha demostrado que los aerosoles contaminados desempeñan un papel importante en la transmisión de Salmonella y se han aplicado con éxito métodos para reducir los niveles de polvo aerosolizado con el fin de disminuir la transmisión de este patógeno en las cabinas de incubación y en las instalaciones de cría de pollos de engorde.

En este sentido, las mejoras ambientales y de gestión centradas en la reducción de los aerosoles podrían desempeñar un papel importante en la prevención de la infección por Salmonella en los cerdos también. Para reducir la transmisión de enfermedades por el aire en los cerdos, el volumen de aire por animal, así como las tasas de ventilación y humedad deben ser adecuados, y deben evitarse las altas densidades de cerdos de cría y el movimiento excesivo de animales . Cabe señalar que estas medidas no sólo disminuyen los aerosoles infecciosos, sino que también contribuyen a reducir el estrés de los animales. Además, la pulverización de aceite o de una mezcla de aceite y agua en el entorno puede reducir eficazmente las concentraciones de polvo en los establos de cerdos . Por último, dado que los piensos son la principal fuente de polvo en el aire, las estrategias de alimentación también deberían considerarse como opciones para reducir el polvo en los establos. La alimentación líquida fermentada se ha asociado a la disminución de la prevalencia de Salmonella en el ganado porcino, probablemente como resultado del efecto combinado de las grandes cantidades de ácidos orgánicos y del gran número de bacterias productoras de ácido láctico presentes en estos piensos . Por otro lado, también hay que tener en cuenta la menor producción de polvo al utilizar este método de alimentación.

En conclusión, es posible la transmisión aérea a corta distancia de S. Agona y S. Typhimurium en cerdos destetados. Deben realizarse más estudios sobre el impacto de la reducción del aerosol y del polvo en el control de Salmonella en los sistemas de cría intensiva de cerdos.